蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

标题: 残存概率法生物指示剂的芽孢含量是多少的 [打印本页]

作者: 呼呼_802 时间: 2014-12-22 09:22
标题: 残存概率法生物指示剂的芽孢含量是多少的
最终灭菌工艺的验证，F0值是8~12，生物指示剂的芽孢含量应该是多少数量级的？3次方的，还是6次方的？

作者: yuansoul 时间: 2014-12-22 09:37
6次方

作者: 葫芦娃 时间: 2014-12-22 10:10
本帖最后由葫芦娃于 2014-12-22 10:17 编辑

个人经验较浅，来回答这个问题试一下。
先说结论：芽孢含量有几种，具体需要看您使用的菌种以及实验情况.
目前市面上有：
a.10的6次方
b. 10的5次方
c. 5*10^5到5*10^6
e. 10的4次方。

首先：了解一下残存概率法
1.残存概率法（备注1）

2.无菌药品附录第六十一条无菌药品应当尽可能采用加热方式进行最终灭菌，最终灭菌产品中的微生物存活概率（即无菌保证水平，SAL）不得高于10-6。采用湿热灭菌方法进行最终灭菌的，通常标准灭菌时间F0值应当大于8分钟，流通蒸汽处理不属于最终灭菌。对热不稳定的产品，可采用无菌生产操作或过滤除菌的替代方法。

3.ISO 11138 -1(2006)

4.生物指示剂（备注2）这里有详细的描述不同实验所使用的不同的生物指示剂及其含量

根据以上四个信息，得出的结论是：芽孢含量有几种，具体需要看您使用的菌种以及实验情况.。

以上资源来源于我们小队伍的博客：药物探索 www.drug007.com 博客收录整理了国内的制药法规和指导原则（全文字版本哦），以及部分词条的整理，来源与网络

备注1：残存概率法 | 药物探索http://www.drug007.com/287.html
备注2：生物指示剂 | 药物探索http://www.drug007.com/658.html

请勿改动原答案，转载需获得本人许可

作者: river66 时间: 2014-12-22 14:42

葫芦娃发表于 2014-12-22 10:10
个人经验较浅，来回答这个问题试一下。
先说结论：芽孢含量有几种，具体需要看您使用的菌种以及实验情况.
...

恩，很细致，不错，谢谢了

作者: 呼呼_802 时间: 2014-12-22 15:27
谢谢

作者: 呼呼_802 时间: 2014-12-22 16:51
打电话咨询生物指示剂的厂家，他明确说使用10的6次方的生物指示剂的话，设定F0值8根本不可能杀死

作者: 呼呼_802 时间: 2014-12-23 10:13
D值和芽孢数均影响灭菌效果，买菌落数10的6次方，D值低一些的比较容易接受

作者: bwybwybwy 时间: 2014-12-24 09:05

呼呼_802 发表于 2014-12-22 16:51
打电话咨询生物指示剂的厂家，他明确说使用10的6次方的生物指示剂的话，设定F0值8根本不可能杀死

会有不能杀死的情况
指示剂的D值需要选择合理结合现有灭菌工艺

作者: bwybwybwy 时间: 2014-12-24 09:05

呼呼_802 发表于 2014-12-22 16:51
打电话咨询生物指示剂的厂家，他明确说使用10的6次方的生物指示剂的话，设定F0值8根本不可能杀死

会有不能杀死的情况
指示剂的D值需要选择合理结合现有灭菌工艺

作者: bwybwybwy 时间: 2014-12-24 09:05

呼呼_802 发表于 2014-12-22 16:51
打电话咨询生物指示剂的厂家，他明确说使用10的6次方的生物指示剂的话，设定F0值8根本不可能杀死

会有不能杀死的情况
指示剂的D值需要选择合理结合现有灭菌工艺

作者: 呼呼_802 时间: 2014-12-24 09:15

bwybwybwy 发表于 2014-12-24 09:05
会有不能杀死的情况
指示剂的D值需要选择合理结合现有灭菌工艺

谢谢，以前都是做过度杀灭的，残存概率的没有做过，这次认真研究了一下，要求初始污染菌小于100cfu/单位，生物指示剂的D值应大于产品或环境中的卫生物的D值，选用10的6次的生物指示剂是大家常用的方法。

现在我们规定初始污染菌小于100cfu/单位，不得检出耐热菌，计划使用枯草芽孢杆菌芽孢，芽孢数10的6次方的指示剂，基本上大家都能接受

作者: bwybwybwy 时间: 2014-12-24 10:43

呼呼_802 发表于 2014-12-24 09:15
谢谢，以前都是做过度杀灭的，残存概率的没有做过，这次认真研究了一下，要求初始污染菌小于100cfu/单位， ...

有些指示剂的D值过大
残存法最终结果可能是失败的
过度的法，微生物外，对热原考虑时，实际对初始菌量也是有要求的

作者: dehuiwang 时间: 2014-12-31 16:34

呼呼_802 发表于 2014-12-24 09:15
谢谢，以前都是做过度杀灭的，残存概率的没有做过，这次认真研究了一下，要求初始污染菌小于100cfu/单位， ...

如果是湿热灭菌法的话，应该选用嗜热脂肪芽胞杆菌孢子，你为啥选择枯草呢，难道你的产品是用干热灭菌法？少见啊

作者: 影甜 时间: 2015-9-7 08:31
不同的灭菌方法，选择的生物指示剂是不同的，若灭菌方法相同，不同的灭菌条件，选择的生物指示剂亦不同。

作者: w2017 时间: 2018-9-19 19:26

呼呼_802 发表于 2014-12-24 09:15
谢谢，以前都是做过度杀灭的，残存概率的没有做过，这次认真研究了一下，要求初始污染菌小于100cfu/单位 ...

你好，我们的情况也基本类似，残存概率法，但枯草芽孢的话，有点不太明白的是，D值0.3-0.7,10的6次方的话，F0=5基本就都杀灭了，怎么证明F0=8呢？谢谢

作者: w2017 时间: 2018-9-19 20:00

bwybwybwy 发表于 2014-12-24 09:05
会有不能杀死的情况
指示剂的D值需要选择合理结合现有灭菌工艺

你好，残存概率生物指示剂验证，F0=8，有阳性，能否根据厂家提供的嗜热芽孢杆菌D值和菌种数，计算残存多少？

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-20 08:10

w2017 发表于 2018-9-19 19:26
你好，我们的情况也基本类似，残存概率法，但枯草芽孢的话，有点不太明白的是，D值0.3-0.7,10的6次方的话 ...

没明白你的意思

作者: w2017 时间: 2018-9-20 09:50

呼呼_802 发表于 2018-9-20 08:10
没明白你的意思

目前想验证F0=8，如果枯草D值为0.7，由10的6次方下降0，或至10的-1次方，不长菌，F0=0.7*（lg106-lg10-1）=4.9，这个F0下枯草已经完全杀灭，那如果F0只要大于4.9，生物指示剂就会显隐性，就不能证明F0是8了，是不是哪里理解有问题？麻烦多多指教，谢谢。

作者: w2017 时间: 2018-9-20 09:50

呼呼_802 发表于 2018-9-20 08:10
没明白你的意思

作者: heibaicaowu 时间: 2018-9-20 11:02

w2017 发表于 2018-9-20 09:50
目前想验证F0=8，如果枯草D值为0.7，由10的6次方下降0，或至10的-1次方，不长菌，F0=0.7*（lg106-lg10-1 ...

您最后使用了生物指示剂有进展吗我现在也是这个困惑

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-21 08:09

w2017 发表于 2018-9-20 09:50
目前想验证F0=8，如果枯草D值为0.7，由10的6次方下降0，或至10的-1次方，不长菌，F0=0.7*（lg106-lg10-1 ...

指示剂还存在存活时间和杀灭时间的概念，所以你的F0值一定要比指示剂的D值乘以下降对数单位高。
F0值8是按照D值为1，初始污染菌100cfu/单位，下降6个对数单位计算出来的，保证初始污染菌和初始污染菌的耐热性符合要求就行；
F0值12是按照D值1，初始污染菌10的6次方，下降6个对数单位计算出来的。
你不可能找到正好的指示剂，如果正好因为指示剂存活时间的问题，那就会有阳性的结果。

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-21 08:10

w2017 发表于 2018-9-20 09:50
目前想验证F0=8，如果枯草D值为0.7，由10的6次方下降0，或至10的-1次方，不长菌，F0=0.7*（lg106-lg10-1 ...

你可以看看你的指示剂说明书，一般有杀灭时间和存活时间的描述，

作者: w2017 时间: 2018-9-21 08:57

呼呼_802 发表于 2018-9-21 08:09
指示剂还存在存活时间和杀灭时间的概念，所以你的F0值一定要比指示剂的D值乘以下降对数单位高。
F0值8是 ...

谢谢
我们程序设的F0=8（最终累计显示的8.8），用的F08-12的湿热芽孢生物指示剂，121℃存活时间2.8min，杀灭时间8.2min，试了两支显阳性。
不好找到正合适的指示剂，那用隐性分数法，lgNO =2.303×lg(n/q) + L×t /Dbi进行计算阳性的数量可以吗？生物指示剂选用及验证这块有什么建议吗，谢谢

作者: w2017 时间: 2018-9-21 08:58

heibaicaowu 发表于 2018-9-20 11:02
您最后使用了生物指示剂有进展吗我现在也是这个困惑

还在咨询中

作者: w2017 时间: 2018-9-21 10:02

w2017 发表于 2018-9-21 08:57
谢谢
我们程序设的F0=8（最终累计显示的8.8），用的F08-12的湿热芽孢生物指示剂，121℃存活时间2.8min， ...

我又确认了下，公式应该这样，lgNO =lg（2.303×lg(n/q)） + L×t /Dbi，计算阳性的数量理解不太对，生物指示剂D值0.9，计算孢子接种量大概要7次方，实际应用中受生物指示剂杀灭时间的影响（生物指示剂信息，数量1.2×10的5次方，121℃存活时间2.8min，杀灭时间8.2min），所以如何处理？

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-22 08:51

w2017 发表于 2018-9-21 08:57
谢谢
我们程序设的F0=8（最终累计显示的8.8），用的F08-12的湿热芽孢生物指示剂，121℃存活时间2.8min， ...

F0值8的话，不能用嗜热脂肪芽孢杆菌的指示剂，一般用枯草芽孢或生suo杆菌；芽孢数10的6次方；这个GMP指南上有说，你可以查一下。
而且F0值8，这个参数有些尴尬，当然也看你灭菌设备、灭菌装载、产品装量、热穿透性等的性能情况。如果你的控制探头是放在产品内部的话，冷点必须找准确，否则有的地方就会低于8了，不符合药品的灭菌要求了，如果控制探头是放在排水口话，灭菌装载、产品装量、热穿透性这几个要注意，说不准是会比8高还是会低

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-22 09:05

w2017 发表于 2018-9-21 08:57
谢谢
我们程序设的F0=8（最终累计显示的8.8），用的F08-12的湿热芽孢生物指示剂，121℃存活时间2.8min， ...

存活时间2.8，杀灭时间8.2，你这批指示剂的D值和芽孢数分别是多少，D值要求1.5~3.0，这样算你这批指示剂得芽孢数不到10的6次方啊

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-22 09:16

w2017 发表于 2018-9-21 08:57
谢谢
我们程序设的F0=8（最终累计显示的8.8），用的F08-12的湿热芽孢生物指示剂，121℃存活时间2.8min， ...

其实指示剂还好说，关键是热穿透需要很好的开发，验证才能顺利，对设备的要求，开发工艺的要求还是比较高的，因为你设定8的话，相当于默认不能太高了

作者: w2017 时间: 2018-9-25 18:57

呼呼_802 发表于 2018-9-22 09:16
其实指示剂还好说，关键是热穿透需要很好的开发，验证才能顺利，对设备的要求，开发工艺的要求还是比较高 ...

谢谢。
1.嗜热芽孢杆菌，参数N0=1.2*105， 121℃，D=0.9min
2.热穿透的验证：装载方式，探头放置在内部（1-2mL、液体），生物指示剂不太容易放的话放置在外部否（样品如前述，比较小），设定F0=8,灭菌柜监测8.8，不能太高这块如何控制？是规定不能超过多少？装载的时候合理分布，避免F0过高？
麻烦多多指教，谢谢

作者: 呼呼_802 时间: 2018-9-26 08:20

w2017 发表于 2018-9-25 18:57
谢谢。
1.嗜热芽孢杆菌，参数N0=1.2*105， 121℃，D=0.9min
2.热穿透的验证：装载方式，探头放置在内部 ...

1. 嗜热脂肪芽孢杆菌你首先确认是否适用于你的灭菌方式，另外你的这个D值为什么这么低啊，芽孢数也少了一些，5*105到5*106；
2. 我说的装载方式其实是开发的时候，产品怎么装载；探头放置在内部（1-2mL、液体）这个其实没大有区别（我曾经试过，没有明显差别），就是有的专家比较较真，PDA TR1上好像说过，小装量的可以放在产品外部；生物指示剂，一般专家不大关注，放产品外部应该问题不大，如果非要放产品内部可以买菌悬液，灭菌柜8.8，你的探头能测到多少，你既然控制8，说明你的产品不耐热，控制到多少应根据你产品的性质确认。灭菌柜是一个比骄傲复杂的东西，装载，探头的位置，准确度，压力，外部能源，压缩空气，这些都会影响，当然如果你的产品没这么高的要求也无所谓

作者: 小金库 时间: 2023-5-5 19:22
感谢分享。

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