老师你好，生孢用FTM 培养出来后用生理盐水梯度稀释，然后用TSA倾注，厌氧包培养，结果每个平板都是无菌生长的，而且平板里面水汽很多。是什么原因呢？感谢

zh11314 发表于 2024-5-10 09:28
直接淘宝买环凯的哥伦比亚平皿和厌氧袋，方便很多

我也想买老师 这实验都是自己掏钱学生党遭不住，要是老师能给报销肯定买平皿计数了

火舞精灵 发表于 2024-5-10 09:13
琼脂粉有个凝胶强度数据，日常半流体培养基的配制一般按1%左右，不同厂家的可能会有差异，试一下就知道了 ...

好的好的  非常感谢老师

直接淘宝买环凯的哥伦比亚平皿和厌氧袋，方便很多

1160471779 发表于 2024-5-9 16:53
好的好的  非常感谢老师解答，老师您的琼脂是买的哪一家我能问一下吗，还是说在淘宝上随便找一家买就行， ...

琼脂粉有个凝胶强度数据，日常半流体培养基的配制一般按1%左右，不同厂家的可能会有差异，试一下就知道了，灭菌后50度左右保存，接种使用后摇匀培养即可，不要等凝固了再使用。

火舞精灵 发表于 2024-5-9 16:38
生孢梭菌在半流体硫乙醇酸盐液体培养基中可以计数，日常使用的流体硫乙醇酸盐培养基加琼脂，这种方式计数下 ...

好的好的  非常感谢老师解答，老师您的琼脂是买的哪一家我能问一下吗，还是说在淘宝上随便找一家买就行，我这里目前没有琼脂，然后琼脂的量和FTM比例大概是多少？

好的好的  非常感谢老师解答，老师您的琼脂是买的哪一家我能问一下吗，还是说在淘宝上随便找一家买就行，我这里目前没有琼脂，然后琼脂的量和FTM比例大概是多少？

生孢梭菌在半流体硫乙醇酸盐液体培养基中可以计数，日常使用的流体硫乙醇酸盐培养基加琼脂，这种方式计数下的菌落生长表观为米粒状，很容易计数的

八档丶电风扇 发表于 2024-5-9 16:19
这个样子是培养时间太长，菌太多了，氧化层所以没有了
1、生孢计数培养时间一般控制在16-20h左右，时间 ...

非常感谢老师！！有可能我复苏的时候吸太多菌液了  我再做一次稀释看会不会好一些 真的非常感谢！！

1160471779 发表于 2024-5-9 15:55
老师您好 为什么我培养的生孢梭菌FTM培养基氧化层部分都没了，我想用FTM计数，发现变成这样了 ...

这个样子是培养时间太长，菌太多了，氧化层所以没有了
1、生孢计数培养时间一般控制在16-20h左右，时间太长容易整支管浑浊
2.稀释的时候要稀释好、计数结果最好在50cfu以下

八档丶电风扇 发表于 2024-5-8 18:23
1.是的、不过是半固态，
2.可以直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存，
一般我们拿来储存的F ...

非常感谢老师解答！！非常清楚明了

1160471779 发表于 2024-5-8 16:57
感谢老师！因为我是刚开始接触这一方面，所以还有些疑问：
1、加琼脂是为了让流体培养基变成固态后方便 ...

1.是的、不过是半固态，
2.可以直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存，
一般我们拿来储存的FTM如果是低温保存的话，传代培养结束后直接液封保存，实验使用的和保存的要分开传代，计数完就直接进行方法适用性试验能来得及，我们日常的操作就是菌种稀释后接种至样品、接种完才进行菌落计数，一般从开始稀释到接种至培养基不超过2h就不会有什么问题。
3、FTM加琼脂配置成固体斜面培养基，接种培养后用液体石蜡封住备用，这个操作没试过，不过琼脂浓度太高也不行的，太高可能会影响氧化层的形成，可能会导致厌氧菌死亡，生孢的保存就拿正常的FTM就好了，如果想长期保存、就用20%甘油冻存管-30℃以下保存

八档丶电风扇 发表于 2024-5-8 10:31
1、计数可以使用厌氧包+TSA或哥伦比亚琼脂，也可以使用FTM,不过需要双倍琼脂浓度，可以直接数菌落的，我们 ...

感谢老师！因为我是刚开始接触这一方面，所以还有些疑问：
1、加琼脂是为了让流体培养基变成固态后方便计数吗？
2、我能否直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存？计数完就直接进行方法适用性试验能来得及吗
3、能否用FTM加琼脂配置成固体斜面培养基，接种培养后用液体石蜡封住备用？
恳请老师解答

春夏秋冬12345 发表于 2024-5-8 09:44
用FT进行复苏复壮，可以取菌液跟甘油按比例混合，-20℃保存。

好的好的  感谢老师

devoter2000 发表于 2024-5-8 09:40
没有厌氧箱，可购买厌氧袋

感谢老师解答

1、计数可以使用厌氧包+TSA或哥伦比亚琼脂，也可以使用FTM,不过需要双倍琼脂浓度，可以直接数菌落的，我们使用的就是FTM，
2、看你买的是什么菌，如果是商业定量菌株，那就不能作为传代使用，只能直接使用。如果是可以传代的菌株，储存在2-8℃，一般可以保存一个月左右，使用前需要重新接种活化。
3、接种可以使用一次性注射器

计数可以用哥伦比亚琼脂加厌氧包

1160471779 发表于 2024-5-8 09:35
非常感谢老师解答，关于第二点我还有些疑问：我制备好的菌要如何保存才能延长备用时间，因为我刚做计数， ...

用FT进行复苏复壮，可以取菌液跟甘油按比例混合，-20℃保存。