转帖——抗体产业更依赖工艺优化还是细胞株、培养基改良？

清歌一曲月如霜

在国内的实际生产中，提高抗体产量、改善抗体质量更主要是依赖工艺优化呢，还是寄希望于细胞株、培养基的改良？或者更直白一点，药厂老总更青睐于手下人用哪种方式来优化抗体生产？


无论是做biosimilar，还是其他重组蛋白药。大家最关心的是往往是三个方面, 蛋白表达量（title）、质量（quality），还有就是进度。
1、Title，细胞培养过程中蛋白的表达量是由单个细胞的产物比生产速率（Qp），活细胞密度（IVCD）以及培养时间（Time）三者决定的。即 Title=Qp*IVCD*Time
Qp代表的是细胞异源表达重组蛋白的能力，它是细胞系构建过程中初筛、复筛的主要技术指标。目前行业内能够用于产业化生产的细胞系，Qp一般可以达到20pg/cell/day以上。 构建的细胞是否能够达到这个水平，一般取决与空宿主、载体、筛选通量，筛选策略。
IVCD活细胞密度和Time培养时间，一般是初筛得到的重组细胞进行培养基优化、工艺开发时，主要考察的指标。目前行业内细胞使用商品化的培养基（Gibico/hyclone等）悬浮细胞密度一般可达1-3*10E7/ml，生长期5-7day，维持期10day以上。此步为细胞培养的工艺开发，需要借助三角瓶、深度孔板、小型反应器等进行培养基筛选、工艺参数优化。
所以，细胞的表达能力一般是细胞系构建工程中就已经决定了。而细胞的培养密度、培养周期则需要在培养工艺开发中进行优化。两者都做好了，抗体的产量自然就有了保证。

谈下质量。

抗体作为四聚体糖蛋白，其生物学活性有赖于其完整的结构和恰当的翻译后修饰。某种角度上说，重组抗体的工艺优化，尤其是做similar，质量比TITER更为重要。
目前重组抗体的制备是采用动物细胞异源表达。其制备工艺中无论是克隆筛选、细胞培养还是纯化工艺都会都抗体的质量造成影响。克隆筛选的常用策略是根据蛋白表达量去挑选高表达克隆。这样就会造成表达水平高、但是存在质量变异的克隆会进入下一轮复筛。但是，在克隆筛选环节考察产物的质量，需要借助高通量的分析设备。细胞培养过程中无论是培养基、培养工艺（PH/DO/TIME），甚至搅拌桨的设计都会影响抗体的质量。另外，纯化、制剂过程中，涉及到的buffer条件不恰当也会造成蛋白聚体的产生。
目前重组抗体工艺开发中，经常关注的几个质量指标有
1、分子量，
2、纯度，即，单体、大分子物质（聚体）、小分量物质（降解）的含量
3、糖基化修饰（寡糖类型及分布，如GO/G1F/G2F/MAN5等
4、等电点。

仲夏秋夜云

个人觉得是细胞株，所以lonza养活了很多人……细胞株是本质啊

清歌一曲月如霜

仲夏秋夜云 发表于 2013-8-27 13:07
个人觉得是细胞株，所以lonza养活了很多人……细胞株是本质啊

细胞株是很关键

仲夏秋夜云

清歌一曲月如霜 发表于 2013-8-27 13:15
细胞株是很关键

先天不足后天难补啊

胜利者

学习了

仲夏秋夜云

胜利者 发表于 2013-8-27 13:55
学习了

有点水……

胜利者

仲夏秋夜云 发表于 2013-8-27 14:06
有点水……

实话