无菌检查隔离器的应用（二）

ISPE

3. 无菌检查在隔离器中的操作过程

3.1 装载
首先准备好所有需要放入隔离器中的供试品、培养基、缓冲液、过滤罐以及相应的工具。按照经过验证的装载方式放入隔离器中。一般过滤罐会悬挂在隔离器上方的挂钩上，供试品、培养基和缓冲液会放置在有间隙的层架上，物料之间不能紧贴在一起，避免灭菌死角。

装载后关闭隔离器门，并且检查隔离器门是否关好，通隔离器是否显示报警。过目测或者使用手套检漏仪对隔离器的手套完整性进行检查。

3.2 灭菌
按照经过验证的灭菌参数，运行隔离器的灭菌循环。根据舱体大小、装载情况以及房间环境，灭菌周期时间在1.5~2.5小时。循环结束后检查过氧化氢在箱体的残留浓度，或者读取在线过氧化氢低浓度探头的读数。

3.3 整理物料
将灭菌后的隔离器中的物料按照操作习惯进行重新调整。以便于戴上隔离器手套后能够拿到所需的物品。

3.4 环境检测
在隔离器的使用过程中需要对环境进行监测，一般隔离器内部集成有在线的粒子计数器，以及浮游菌采样装置。另外在隔离器的操作平面上要放置沉降菌的培养皿。在手套手指、手掌、仪器、包装等表面进行表面微生物取样，待测试完成后传递出进行培养。

3.5 根据药典方法进行无菌检查。测试完成后，建议再对手套的手指、手掌部分的表面进行微生物取样。

3.6 转移培养罐和清场
对于每天一次的测试，可以直接打开隔离器门，取出培养罐。如果是连续式的排班，则可以通过传递窗或者其他无菌转移方式将培养罐传递出来。对于使用完的供试品包装、培养基和缓冲液的包装等可以打开隔离器门或者从传递窗转移出来。

3.7 隔离器的清洁
隔离器在使用后需要进行清洁，一般使用酒精或者异丙醇等对隔离器内部进行擦拭。擦拭的原则是从上到下，从后到前的顺序。在擦拭时如果隔离器体积较大，可以使用专用的清洁工具对隔离器内部进行清洁。

3.8 连续使用隔离器
对于连续批次的无菌检查，隔离器的主箱体门不开启，通过传递箱或者另一个箱体将灭过菌的物料传递至主箱体中。在这种应用时，更应该加强对隔离器内部微生物的检测。确定主箱体灭菌的最低频率。

4. 隔离器的手套
无菌检查的操作对手套的使用操作频繁，工艺过程中常常会用到剪刀、针头或注射器，包括西林瓶铝盖的开封口，这些都会增加手套破损和加速老化。尤其是在手指部分。因此手套的完整性需要在操作前后进行检查。

手套的检查方法有两种：
(1)目测是最简单，也最便利的测试方法。一般将手套最容易损坏的部位进行适当的拉伸，检查是否有明显破损。同时检查手套是否有龟裂、老化现象。
(2)手套检漏仪，利用保压法来对手套进行检查。

手套的完整性检查需要日常记录。

通常在佩戴隔离器手套之前，操作者会先佩戴一层无菌手套。在国外的实际应用中，有的操作者会在隔离器的手套外再戴一副无菌手套。下图为在隔离器的手套上在戴一层无菌手套。



手套在灭菌过程中，应该使用手套支撑架将手套撑开，确保手套表面能充分的暴露在灭菌气体中。验证时候需要在手套手指部分也贴上指示剂。

一般建议手套根据使用情况定期更换，尽量避免在无菌检查过程中去更换。如果在操作过程中发现手套被针头扎破，如果不是很大的破损，隔离器没有报警生成，则建议首先记录这个事件发生的时间，操作的供试品编号或者培养罐编号；同时可以在破损处做一个表面微生物留样，然后戴一层无菌手套，继续做测试。

5. 总结
隔离器的使用是一个熟悉和认知的过程，操作者需要充分了解在隔离器操作中的限制性，在正式测试前，多做几次模拟，形成一个合理的SOP，并且考虑无菌检查过程中可能出现的突发状况，在隔离器中的处理方式。在不断的实践中更好的完善操作工艺。

wanggui_929

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道路漫长黑暗

谢谢分享，整理步骤确实很有必要

smalltrees

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copperli

暂时没用过RABS和isolators，学习一下

涅翼

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Mars_Skylight

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峰谷风景

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xylei

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leoo黎

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一墨

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湿地渔翁

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玉溪微微

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