液相色谱柱使用问题

囧囧 · 发表于 2015-12-23 23:29:29

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各位前辈，小弟最近做分析遇到一个头疼的问题，希望大家给点意见，我要参考一下，先谢过了。
先给出我的分析方法，大家看一下。
   Time       Meth(%)    0.025mol/L磷酸二氢钾(%)
   0-20min       45                55
   20-40min       45-60          55-40
   40-67min       60-80          40-20
   67-87min       80                20
   87.01min       80-45          20-55
87.01-105min    45                55
柱温为30度，流速1ml/min。
   那么问题来了，用C18色谱柱做样时非常容易造成压力升高，基本每跑一针压力就会升高0.4Mpa左右，每两天天就要更换预柱柱芯，否则压力就超过上限25MPa，新预柱只有14Mpa左右。发现该问题后，我们进行了排查，流动相是过滤的，盐溶液与甲醇不同梯度比例也混合过并过夜放置，但并没有发现大颗粒固体析出，另外，样品的溶解度在水中及甲醇中都是属于易溶，不纯在样品析出问题。样品纯度也很高，没有什么杂质。
   再一个就是，压力变化有一个规律的情况，就是每分析10个左右的样品就会出现一个怪现象，就是某个样品分析时压力在甲醇比例达到80%的时候会突然降为零，然后在0-2MPa左右波动，并且在甲醇比例重新回到45%时压力就会正常（即是直线）。在此已经排除了仪器漏液的情况。
   另外，正常水洗后压力会继续升高，也就是说水洗无效，用酸水冲洗可以将柱压降低一点，但柱效也随之下降，出现裂峰，拖尾峰等。
重点问题
1，有没有前辈给点提示，可能的原因有哪些？
1，在不更改色谱条件的情况下，有没有办法改进某些条件，使之可以正常分析样品。

syhorchid · 发表于 2015-12-24 00:07:09

坐沙发

syhorchid · 发表于 2015-12-24 00:07:45

可能是样品极性比较小的缘故吧

chaiyingjie2005 · 发表于 2015-12-24 08:33:03

从流动相本身来看没什么特别的，不知道LZ有没有把流动相预混好再跑过。

charls · 发表于 2015-12-24 08:35:30

看你上面的描述应该是仪器流路有问题，不知道你用的什么仪器，肯定是单向阀那里有盐析出，因为甲醇和磷酸二氢钾很容易析出盐分，所以得拆下来洗一下或更换。

实验室 · 发表于 2015-12-24 08:47:45

个人看法与楼上一致，看你的描述，流动相柱子都是很普通的东西，我觉得仪器的流路和泵的可能性比较大，你可以换个别的检测试试，通过对比来查看问题，

囧囧 · 发表于 2015-12-24 09:17:27

chaiyingjie2005 发表于 2015-12-24 08:33
从流动相本身来看没什么特别的，不知道LZ有没有把流动相预混好再跑过。

流动相预混梯度跑不出来，不知道为什么。基线完全不一样。

囧囧 · 发表于 2015-12-24 09:36:55

实验室发表于 2015-12-24 08:47
个人看法与楼上一致，看你的描述，流动相柱子都是很普通的东西，我觉得仪器的流路和泵的可能性比较大，你可 ...

我们一个组五台仪器都存在压力升高过快的问题！

囧囧 · 发表于 2015-12-24 09:38:20

charls 发表于 2015-12-24 08:35
看你上面的描述应该是仪器流路有问题，不知道你用的什么仪器，肯定是单向阀那里有盐析出，因为甲醇和磷酸二 ...

我也怀疑单向阀那里有盐析出，否则压力降为零不科学。

实验室 · 发表于 2015-12-24 10:36:38

囧囧发表于 2015-12-24 09:36
我们一个组五台仪器都存在压力升高过快的问题！

5台仪器现象都一致，那最可能的就是方法本身的问题了，再仔细看了你的梯度，有个部分出现80%甲醇和盐的混合，这个极端比例可能造成盐的析出，再看你的现象出现压力为零，曾经我们也有一个品种梯度变化太快导致压力为零……如果有可能再考察下方法的梯度，多用热水冲洗通道

实验室 · 发表于 2015-12-24 10:37:51

chaiyingjie2005 发表于 2015-12-24 08:33
从流动相本身来看没什么特别的，不知道LZ有没有把流动相预混好再跑过。

梯度的，怎么混合………………

gabfghy990205 · 发表于 2015-12-24 11:35:44

柱压是通过什么检测的？
如果是通过泵压来体现的话，你就要拆单向阀来洗一下

灵光 · 发表于 2016-1-29 10:45:04

chaiyingjie2005 发表于 2015-12-24 08:33
从流动相本身来看没什么特别的，不知道LZ有没有把流动相预混好再跑过。

人家跑的是梯度洗脱怎么可能预混呢

灵光 · 发表于 2016-1-29 10:49:42

1建议换个厂家的色谱柱看看 2如果是单向阀盐析出的出题我觉得拆下来清洗一下！日常昨晚就检验冲柱的时候要跑低甲醇久点！或者做酸盐流动相之前先用低甲醇跑一段

ywz · 发表于 2016-1-30 13:59:18

感觉是有盐析出。一般做这种，做前和结束都要先用90%水，10%甲醇冲30分钟以上，防止盐析出。现在用90%水冲洗看看

液相色谱柱修复 · 发表于 2024-4-8 13:24:12

可以考虑做个预混

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