HPLC桔梗含量检测

12aluo

供试品溶液的制备取本品粉末（过二号筛） 约 2g， 精密称定， 精密加人5 0%中 醇 50ml， 称定重量， 超声处理（功率250W， 频率40kHz)3 0分钟，放冷，再称定重量，用 50%甲醇上蒸干， 残渣加水20ml， 微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤， 弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解， 加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱[100〜120目，10g，内径为2cm，用二氯甲烧- 甲醇（9 ：1)混合溶液湿法装柱]上 ，以三氯甲烷-甲醇（9 : 1) 混合溶液50ml洗脱， 弃去洗脱液， 再用三氯甲烷-甲醇—水(60 : 20 ：3)混合溶液100ml洗脱， 弃去洗脱液， 继用三氯甲烷-甲醇-水（60 :29 : 6)混合溶液100ml洗脱，收集洗脱液， 蒸干，残渣加甲醇溶解， 转移至5ml量瓶中， 加甲醇至刻度， 摇匀， 滤过 ，即得。
我用上面药典的方法检测桔梗皂苷D含量，在用三氯甲烷-甲醇—水(60 : 20 ：3)混合溶液100ml洗脱，即第二次过硅胶柱，能检测到皂苷D，但第三次过硅胶柱洗脱后，没有了。请问是哪里出了问题？

石头968

真不懂