请教：关于内毒素检查用水标准

zyd24

中国药典中内毒素检查法中如下规定：细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒
素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法）或0. 005EU/ml(用于
光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。
同时中国药典中关于灭菌注射用水的内毒素标准为：“内毒素照注射用水项下的方法检查，应符合规定。”注射用水细菌内毒素标准为：：“每lm l中含
内毒素的量应小于0.25EU。”
这前后不一致呀？

黎明曙光

细菌内毒素检查用水与灭菌注射用水的区别：酸碱度、细菌内毒素和干扰因素。
1 酸碱度 鲎试剂与内毒素反应的最适宜pH在6.5-8.0，故鲎试验时，美国、日本药局方以及中国药典2015版规定检品必须调节PH值6.0-8.0。细菌内毒素检查用水的pH值一般控制在6.0～8.0；灭菌注射用水的pH值应控制在5.0～7.0。由于大部分药品呈弱酸性，故细菌内毒素检查用水的pH值有利于鲎试验。
2 细菌内毒素 细菌内毒素检查用水每1ml中含内毒素量至少应小于0.015EU，定量法用细菌内毒素检查用水每1ml中含内毒素量应小于0.005EU；灭菌注射用水每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。细菌内毒素检查用水本身的内毒素必须足够低，不应对试验结果产生影响，如果用灭菌注射用水代替检查用水做鲎试验，由于灭菌注射用水中内毒素含量较高，灭菌注射用水和被测样品中内毒素叠加可能产生假阳性，造成企业直接经济损失。因内毒素含量的差别，故不能用灭菌注射用水代替检查用水做鲎试验。
3 干扰因素 细菌内毒素检查用水必须对鲎试剂、内毒素标准品和鲎试验不得有干扰；灭菌注射用水对此无要求。灭菌注射用水要求安全稳定，但灭菌注射用水是否会影响细菌内毒素标准品的活性和稳定性？灭菌注射用水是否对鲎试验产生增强或抑制作用？很少有人对此做过长期的考察。经考察验证部分灭菌注射用水对鲎试验存在很强地抑制作用，如果用灭菌注射用水代替检查用水做鲎试验，可能产生假阴性，造成内毒素漏检，直接威胁用药安全。因灭菌注射用水干扰因素的存在，故不能用灭菌注射用水代替检查用水做鲎试验。
如果能保证洗涤用水、洗涤方法和试验用水的准确，鲎试验中阳性对照不成立的可能性基本不存在，除非使用的标准品不规范。为了保证试验结果准确。
你要做到以下几点：（基本无敌）
1 熟悉标准及行业规范（就是看书，拿我来说，每天看2小时书)
2 使用合格的产品及标准品；
3 严格按操作规程进行操作。

zyd24

谢谢黎明曙光！！！
一开始没看懂中国药典，现在明白了。细菌内毒素检查用水首先应符合灭菌注射用水标准，并高于此标准。

野风吹北

黎明曙光 发表于 2016-6-1 08:51
细菌内毒素检查用水与灭菌注射用水的区别：酸碱度、细菌内毒素和干扰因素。
1 酸碱度 鲎试剂与内毒素反应 ...

大师，关于此问题，国标15811-2016里面明确指出了用0.9%无菌、无热原的氯化钠溶液浸提，想请教下，该如何制备0.9%的无菌、无热原氯化钠溶液（市面买不到）？还有一个问题是，为啥氯化钠溶液对对鲎试验存在抑制性作用，为啥国标还是固定浸提溶液为0.9%的无菌、无热原的氯化钠溶液呢？

littlejavk

实验室获得细菌内毒素检查用水的方法通常涉及以下几种途径：

一、购买商业产品
供应商选择：实验室可以选择从专业的生物技术公司或试剂供应商处购买细菌内毒素检查用水。这些公司通常提供符合标准、质量可靠的产品，并能够满足不同实验需求。
产品规格：购买时，可以根据实验的具体需求选择不同规格的产品，如2ml、10ml、50ml等。
质量认证：确保所购买的产品已通过相关的质量认证，并符合实验室的标准和要求。
二、自制
虽然自制细菌内毒素检查用水在实验室中并不常见，但理论上，如果实验室具备相应的条件和设备，也可以尝试自制。然而，自制过程需要严格控制各个环节，以确保水质的纯净度和内毒素的低含量。这通常包括使用高纯度的水源、严格的除菌和去内毒素处理等步骤。

三、常用检查方法
细菌内毒素检查用水主要用于支持细菌内毒素的检测实验，其检查方法通常包括以下几种：

凝胶法：利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，通过观察反应混合物的凝胶化情况来判断内毒素的含量。这种方法操作简便，但灵敏度相对较低。
光度测定法：包括浊度法和显色基质法。浊度法是通过检测反应混合物浊度的变化来测定内毒素含量；显色基质法则是利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团，从而测定内毒素的含量。光度测定法具有较高的灵敏度和准确性，能够定量检测内毒素的含量。
四、注意事项
内毒素污染：在实验过程中应严格防止内毒素的污染，确保实验结果的准确性和可靠性。
质量控制：定期对购买的细菌内毒素检查用水进行质量检测，确保其符合实验室的标准和要求。
存储条件：按照产品说明书的要求妥善存储细菌内毒素检查用水，避免其受到污染或变质。
综上所述，实验室获得细菌内毒素检查用水的主要方法是购买商业产品，并可选择合适的检查方法来进行实验。同时，在实验过程中应注意防止内毒素的污染和确保水质的纯净度。