革兰染色法

吴生谦

革兰染色法

1、涂片：用纱布擦净玻璃片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔(落)或液体培养基培养物(不必加盐水)，在玻璃片中央涂成一薄膜。

2、干燥：涂片后放室温中自然干燥。

3、固定：将玻片迅速通过火焰3次(其目的是杀死细菌)，使菌体与玻片粘附牢固，以及改变对染料的通透性。

4、初染：滴加结晶紫染液于已固定的玻片上，染1 min，水洗。

5、媒染：滴加碘液，作用1 min，水洗。

6、脱色：加95％酒精于涂片上，轻轻摇动7～8次，使均匀脱色至涂面无紫色或稍成淡紫色，立即水洗。

7、复染：用石炭酸复红稀释液染0.5min，水洗，用滤纸吸干。于涂片上滴加少许香柏油，镜检。

8、镜检：用油镜观察标本时，先以低倍镜对光，光线宜强，并开大光圈升高集光器。从侧面转动选择油镜头，将油镜头浸于涂片油内，然后由接目镜中观察物象，观察时可先调粗调节器，当看到物像时，再旋转细调节器，直至物像清晰为止。绩显著

9、结果：菌体呈紫色者为革兰阳性；呈红色者为革兰阴性。   

轰天乌驹

怎么看都像是我大学的微生物试验教材上的

可亲可爱

别这样一点一点，有没有资料发上来让大家 瞧啊

90生物制药

还有一部分细节没有注意到！涂片，最好首先用酒精棉球擦再点燃，洗脱哪一步，如果掌握的不好的最好用流动的酒精冲洗，无色马上水洗！！第三当使用到油镜时禁止使用粗调，特别是初次使用，理论上用细调，稍微使物镜上升就能很清楚看到啦！！这个实验我在学校做了两年，如有不对请指正！！谢谢，共同成长

燕长风2013

90生物制药 发表于 2012-4-29 15:16
还有一部分细节没有注意到！涂片，最好首先用酒精棉球擦再点燃，洗脱哪一步，如果掌握的不好的最好用流动的 ...

请教个问题：挑取菌时，用接种环在盐水上涂抹了好长时间，但是染色结果仍旧感觉没有涂开，菌一团团的。
脱色时，用酒精冲洗，无色时水洗，我也曾这样试过，但是仍不是特别好把握。

90生物制药

燕长风2013 发表于 2013-4-3 16:35
请教个问题：挑取菌时，用接种环在盐水上涂抹了好长时间，但是染色结果仍旧感觉没有涂开，菌一团团的。
...

对于你说菌成团的问题我分析就是你挑的太多了，这个问题有两个解决办法，第一就是用接种环挑菌事注意力度，而实在是挑的菌太多，你可以将接种环轻轻在生理盐水上面画过两次，这个时候接种环上面还残留的菌就放到酒精灯上面烧死（至通红）呆接种环冷下来后在把生理盐水摊开（注意生理盐水的量，一滴就够）脱色是革兰氏的关键，这个没有方法就按照规程去做，去感觉就好（脱色的联系我建议你一个方法，找一个标准的革兰氏阳性阴性菌回来，先单独操作，再将两个菌混合涂板，在混合板中你能分的很清楚就说明你已经基本掌握了！！！加油，

chengang0223

90生物制药 发表于 2013-4-5 13:12
对于你说菌成团的问题我分析就是你挑的太多了，这个问题有两个解决办法，第一就是用接种环挑菌事注意力度 ...

同意，在同一个玻片上面做对照，这个可以验证实验过程是不是有正确的。

燕长风2013

谢谢各位！

w77641086

谢谢分享，楼主辛苦了

小金库

谢谢分享，学习中...