【HPLC异常问题及解决】异常5：分离度差或者峰型分裂

北重楼

分离度变差从指南上来看有两个方面的原因，一个是流动相的污染，另一个原因在于柱子的损坏及效能变差。

流动相的污染处理比较简单，重新配制新的流动相就可以了，对于柱子的效能变差，在有预柱的情况下，可以先更换一根预柱试试，如果是分析柱的问题，可以试着对色谱柱进行冲。

反冲的具体方法是，将色谱柱的出口处与流动泵相连，采用2倍速的标准流量，5~10倍量的柱体积对色谱柱的柱头进行反冲，通常情况下，反冲可以将阻塞柱头的微小的颗粒冲掉，所以对于HPLC的供应商而言，通常的建议是需要采取预柱或者保护柱的，再来一张比较经典的HPLC色谱柱的构成图供参考。




如果分析柱真的已经受损了，最后的步骤或许就需要尝试着进行色谱柱的恢复或者所谓的柱子的再生，具体的方法我们后面会提到，不过通常的感觉与其花这么多成本去恢复色谱柱，并承担着实验失败的结果，倒真不如一次性投入，换根新的色谱柱。




峰型发生裂峰的原因概括起来有四点，有些原因也已经在前面章节或者上周的推荐中说过了，比如柱头被污染、流动相溶剂与样品溶液不相溶以及柱头处的污染，裂峰还有一个原因在于柱头处的细微的空隙，如果你没有拆过色谱柱的话，或许是色谱柱在运输的过程中受到了损坏或者柱子生产工艺的问题，这种情况下，指南给出的建议也很夸张，居然是将色谱柱反用，一定要记得，在反用前，先不要急着将检测器接上，让柱子用空白的流动相多跑一跑，将其中的脏东西冲干净……不过这种做法应该不算是常规做法，友情提示，反用的色谱柱一定要有明显的标识。



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转载于PharmaGMP

hzleiyu

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youngzhou

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边际

怎么看不到图？