关于使用超滤去杂蛋白问题

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本人是做人用疫苗的纯化，主要是超滤浓缩

采用的是默克密理博的 截留分子量为300KD 10平方米膜包

由于样品中含有大量杂蛋白，在后面工艺中由于蛋白含量过高而影响工艺，因此想通过超滤来去除一些杂蛋白

目前采用的方法是先浓缩到一定体积后，添加PBS进行稀释然后再浓缩到相同体积，再添加PBS进行稀释然后浓缩到相同体积，如此进行多次。

最后浓缩到一定体积后然后进行收样，使用PBS冲洗膜包后将冲洗液一并收。

但膜前蛋白去除只有70%~75%，想问各位坛友   1、如何能更多的去除杂蛋白    2、如何在最后减少膜上附着的损失。

逍遥黑熊

基本和我们原代细胞培养的疫苗一致，我们是100KD，洗滤5-10次~~~由于我们的超滤量大，更多的去除杂蛋白没有做过相关研究，去膜损失曾经有试过分次超浓，比如我们收获液是50L的桶，先超浓50L到30倍，转移到暂存罐，然后继续拿新的50L超滤，最后在暂存罐里面加PBS洗滤，结果没什么鸟用，反正只是告诉你一条失败的路线，不要尝试，囧~~~

cnosema

你的目标产品，分子量大概是多少？样品中的杂蛋白，分子量大致范围是多少？

如果你只使用一个MWCO的膜包，无论你用多少体积的PBS进行洗滤，洗去的都只有小于这个分子量的杂蛋白。大分子量的杂蛋白，和你的目标产品，是一直被截留的哈。

xufubing

光靠物理手段可能不行啊，化学沉淀试试！

爱吃焦锅巴

谢谢分享~~~~~~~~~~~~~~

wzj24233

仔细分析下料液中蛋白的属性。也许你得到的结果是正常的也说不定。

德尬

路过   学习了  谢谢！

小金库

非常感谢分享

A风和日丽

可以尝试超滤之前做连续流离心

小林77

等体积超滤比你这个等体积稀释的效率要高。当然要基于你的杂蛋白分子量能穿透的情况下。