紧急求助:出大事了，HPLC主峰后有一个紫外光谱图一致的小峰的

JingleDancer

zfamous 发表于 2019-3-19 10:03
你说减少进样量峰就消失了，看你这个图真的不像是进样量过载，过载了应该是平头峰，或者是分叉峰。这个图 ...

据我分析，你描述的过载即出现平头峰是样品浓度大，色谱峰的响应超过了检测器显示的最大值；在我的这种情况下，主峰未出现平头峰，但后面会有小峰，依我理解是主成分与色谱柱固定相的相互作用（比如吸附）达到了饱和，导致主成分在色谱柱内产生了一段浓度梯度，导致主峰严重拖尾或出现小峰的情况，我减低了进样针的进样量就没了。

JingleDancer

卢青 发表于 2019-3-19 10:19
过载还有这样的问题啊，进样量减少了多少？是降低浓度还是减少进样体积？

10ul----5ul

zfamous

JingleDancer 发表于 2019-3-19 14:37
据我分析，你描述的过载即出现平头峰是样品浓度大，色谱峰的响应超过了检测器显示的最大值；在我的这种情 ...

现在的液相色谱系统，至少也是工作站了，不存在响应超过检测器限值的情况。你说的这种情况是老早以前，纸带的仪器事情，还要调整灵敏度什么的。
达到饱和了，同一浓度的达到塔板上限，这一段时间的浓度一样，所以会是平头峰啊。即使产生浓度梯度，也应该看起来是个分叉峰的样子啊。但是看您这个图，后面的小峰的吸光度低很多，这浓度梯度差的有点太多了。
你这种后面有小峰的，看起来像是流动相溶解性不如稀释剂，进样后部分析出，析出部分又溶解在之后的流动相里，如果您有兴趣研究一下，可以找一台管路更粗的色谱仪，如果是溶剂效应，那么小峰就会变小，如果是过载，色谱图应该不产生变化。
我们之前也有过相似情况，把稀释剂换成流动相就解决了

JingleDancer

zfamous 发表于 2019-3-19 18:17
现在的液相色谱系统，至少也是工作站了，不存在响应超过检测器限值的情况。你说的这种情况是老早以前，纸 ...

因溶解度差异，主成分遇到流动相析出一小部分，好像解释的通，之前我也这样想过，但是改为流动相溶解并未改善，实际上我的主成分1mg/ml，试验显示流动相溶的话5mg/ml仍可溶解，基本可排除这个理由

夜羽

我认为不是过载，遇到的过载有胖峰、拖尾、前沿、平头峰、分叉峰，这时可以通过减少进样量、换色谱柱、调节检测方法去改善。但我遇到的和楼主一样图谱且两个峰光谱图一致的，经过排查，有三种情况：1.样品中已有的杂质，通过换色谱柱、调节检测方法使峰达到分离；2.样品过期或保存不当；3.样品溶液配制过程出问题。