VHP灭菌效果

katy

最近我和同事们做了3台泰林的STP-125型VHP无菌传递舱（工作室尺寸：500mm*700mm*500mm）灭菌效果确认，均有菌生长。
菌片：2.1*10的6次方的嗜热脂肪芽孢杆菌菌片；厂家：MesaLabs；D值：1.5min in 2.0mg/L gaseous H2O2；有效期：2020.01.31。
过氧化氢为食品用过氧化氢消毒液；H202含量：35%；有效期：2019.09.11。
灭菌物品：第一台（去年装载64副手套都是好的）：60副手套；第二台：28副手套，3瓶杀孢子剂；第三台（去年刚做首次确认）：25副手套，2瓶杀孢子剂。所有手套均放置架子上，每只都分散开了。
参数设置：   除湿：40%；调节时间：20min；调节流量：2.5g/min；灭菌时间：试过20min和30min的，都长菌；灭菌流量：2.0g/min。
之前一直在湿度上找原因，更换新的4A分子筛，在灭菌前先用计量过的温湿度计校准了湿度，试过先除湿，除到不能再往下掉的状况下，再运行程序。还是有菌生长。
过氧化氢也是从仓库新领，做确认开封的。
急需路过的各位老师帮帮忙看看，还有什么原因会影响VHP的灭菌效果，十二万分谢谢。。。

lszeric

If we cast our minds back a number of years, when VHP was being used to decontaminate the internal surfaces of isolators (not the indirect or direct contact parts) there were a number of issues seen with biological indicators failing the process due to clumping of spores at a microscopic level. This led to a number of papers being written (such as “Biological indicators don’t lie, but in sporicidal gassing disinfection cycles do they sometimes confuse the truth?”, European Journal of Parenteral & Pharmaceutical Sciences 2009; 14(1): 5-10 © 2009 Pharmaceutical and Healthcare Sciences Society) that justified biological indicator failure at one or two locations based on statistical analysis. The papers also recommended that a number of indicators (usually 3) be placed at each location to demonstrate a 3 log reduction (which is not a sterilisation process). This, along with other evidence, such as VHP failure due to very minor occlusion, even to the degree that fatty acids from a fingerprint may “protect” contaminating organisms from the VHP demonstrate the true fragility of the process as a sterilant.

如果我们回想几年，当VHP被用于净化隔离器内表面（而不是间接或直接接触部件）时，出现了许多生物学指标因孢子结块而失败的问题在微观层面。这导致了许多论文的撰写（例如“生物指标不说谎，但在杀菌消毒循环中它们有时会混淆事实真相？”，European Journal of Parenteral＆Pharmaceutical Sciences 2009; 14（1）：5 -10©2009 Pharmaceutical and Healthcare Sciences Society），根据统计分析，在一个或两个地点证明生物指标失效。文件还建议在每个地点放置若干指标（通常为3个）以显示3个对数减少量。这与其他证据一样，例如由于非常小的阻塞导致的VHP失败，甚至到来自指纹的脂肪酸可以“保护”微生物免受VHP，证明了该过程作为灭菌剂的真正脆弱性。

katy

北京美科-第三方 发表于 2019-7-26 14:54
你可以看看放置位置，灭菌过程中湿度多少？排空时候会不会有泄漏？

灭菌段湿度50%-65%之间，也尝试做压力测试了，没成功。因为设置参数的起始压力：60Pa，；结束压力：42Pa；当（压力测试）运行时，压力达到380-390Pa，两个多小时后，压力才降到200Pa，然后又自己开始往上升了。

lilian2007177

看一下你舱体内过氧化氢多大浓度维持多长时间，用化学指示剂看一下有没有分布上的不均匀

katy

lilian2007177 发表于 2019-7-26 09:04
看一下你舱体内过氧化氢多大浓度维持多长时间，用化学指示剂看一下有没有分布上的不均匀

每次灭菌放的15个化学指示卡全都由绿色变黄色，灭菌初始浓度700ppm以上，灭菌结束浓度400ppm以上

lszeric

不要紧张。VHP灭菌过程相对脆弱，统计表明，确实有部分案例VHP灭菌不能通过挑战。

借月树

过氧化氢灭菌很容易受环境影响（如空间内部布局，内置物阻挡等），所以一般都需要进行很多次尝试才能成功，根据你的阐述，无法确认关键，但有以下建议。
建议：
     1.查看生物指示卡灭菌条件，要求的多少浓度与时间所多少？；
     2.咨询厂家建议的灭菌浓度维持时间（他们心里应该有数在那个范围，因具体情况可能需要调节）；
     3.“灭菌时间：试过20min和30min的”是指高浓度维持时间？，还是你们打印出来的灭菌数据时间？
     4.开始灭菌700以上（过程肯定增加），灭菌结束却只有400（通风前？），要么就是量没用足，要么气密性问题，或者说你们浓度监控准确么；
    信息了解不足，只能帮你到这了。

katy

lszeric 发表于 2019-7-26 09:49
不要紧张。VHP灭菌过程相对脆弱，统计表明，确实有部分案例VHP灭菌不能通过挑战。

上年做的都好好的，而且灭菌流量1.5g/min，都能合格呢

lszeric

katy 发表于 2019-7-26 10:12
上年做的都好好的，而且灭菌流量1.5g/min，都能合格呢

上年运气好。有可能，菌片的细微差别就可能导致灭菌失败。

qianhaoduo111

lszeric 发表于 2019-7-26 09:49
If we cast our minds back a number of years, when VHP was being used to decontaminate the internal s ...

这句话以前看到过，后来怎么都找不到了，能分享一下文件吗？

北京正洁-第三方

你可以看看放置位置，灭菌过程中湿度多少？排空时候会不会有泄漏？

katy

借月树 发表于 2019-7-26 09:51
过氧化氢灭菌很容易受环境影响（如空间内部布局，内置物阻挡等），所以一般都需要进行很多次尝试才能成功， ...

厂家工程已经被我们烦的，表示不想理我们了

fhts4540

是所有点上微生物挑战失败吗？还是个别？浓度达到后，整体保持过程时间是否充足（与菌片反应时间）？还有实验室培养过程有没有异常？

katy

fhts4540 发表于 2019-7-29 09:02
是所有点上微生物挑战失败吗？还是个别？浓度达到后，整体保持过程时间是否充足（与菌片反应时间）？还有实 ...

肯定不会是所有的啦，边角的不好，每次不好的也不是同一点。实验室那边直接把菌片丢进5mlTSB试管，58℃培养7天，没有问题

fhts4540

katy 发表于 2019-7-29 10:30
肯定不会是所有的啦，边角的不好，每次不好的也不是同一点。实验室那边直接把菌片丢进5mlTSB试管，58℃培 ...

小设备上曾经遇到过VHP消毒后立即取出生物挑战，送检呈阳性。得出结论增加保持时间（算上通风扩散时间）；也曾遇到过实验室做出假阳性。

katy

fhts4540 发表于 2019-7-30 08:13
小设备上曾经遇到过VHP消毒后立即取出生物挑战，送检呈阳性。得出结论增加保持时间（算上通风扩散时间） ...

通风95/90/60分钟，每次都是三批结束后一起送至微生物室检测，每批都会有一两支长菌。三台VHP，一共做了15批了，12批长菌的，这个假阳性的频率也太高了吧

liangshuang

以我拙见：
1.按照您的说法，浓度400-700ppm是完全没有问题的；
2.更换过分子筛，湿度提前确认也没问题；
3.按照1的说法，加药量也是没有问题的（显示值与实际值）；
4.设备不保压
由以上四点分析，可能存在问题：
1.操作SOP是否与供应商操作流程一致（不要小看这一条）；
2.使用菌片与供应商提供的是否一致；
3.满载状态是否与初验证一致；
4.培养过程是否按照流程，阳性对照放在最后做；
5.灭菌过程中是否会出现水雾现象，导致VHP汽化不完全，影响灭菌效果

katy

liangshuang 发表于 2019-8-2 11:11
以我拙见：
1.按照您的说法，浓度400-700ppm是完全没有问题的；
2.更换过分子筛，湿度提前确认也没问题； ...

1.每年确认都是同一位同事在操作；
2.每年的确认全是用MesaLabs家的2.1*10的6次方的菌片，但是这次试了2个批号的，都不行。生产日期为：2019.02.27和2019.04.24；
3.满载装载唯一不同的是少了4副手套；
4.每台VHP传递舱3批确认做完一起送微生物实验室，一共18支样品，一支阴性，1支阳性。
5.无水雾现象。

liangshuang

katy 发表于 2019-8-2 11:31
1.每年确认都是同一位同事在操作；
2.每年的确认全是用MesaLabs家的2.1*10的6次方的菌片，但是这次试了2 ...

遇到这种情况，据我的经验，以下几种可能：
1.浓度传感器校准问题，传感器错误显示浓度；
2.过氧化氢失效；
3.菌种稳定性问题。

katy

liangshuang 发表于 2019-8-2 16:06
遇到这种情况，据我的经验，以下几种可能：
1.浓度传感器校准问题，传感器错误显示浓度；
2.过氧化氢失 ...

嗯嗯，有台VHP传递舱去年才首次确认的新的，如果浓度传感器问题，不想怀疑3台全都有问题；它们的共同点过氧化氢和菌片，菌片已经换过刚买的新菌片了，我很怀疑过氧化氢，在等待新的过氧化氢呢