消毒剂效果验证中对应的中和剂问题

sunli0710

最近在做消毒剂消毒效果验证实验，在网上查到75%酒精对应的中和剂使用1%卵磷脂+0.1%吐温80，按照5组试验操作：菌种选择106CFU/ml，使用了金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌，枯草芽孢杆菌和白色念珠菌。

组号	混合液A	混匀作用    10min	混合液B	混匀作用    10min	取混合液B或混合液B的稀释级溶液1ml平板计数（2皿/组）
	取0.5ml工作菌液加入下列溶液中		取混合液A  0.5ml加入下列溶液
1	消毒剂4.5ml		稀释液4.5ml		混合液B、10-1
2	消毒剂4.5ml		中和剂4.5ml		混合液B、10-1
3	中和剂4.5ml		稀释液4.5ml		10-2、10-3
4	中和产物4.5ml（消毒液与中和剂比例为1:1）		稀释液4.5ml		10-2、10-3
5	稀释液4.5ml		稀释液4.5ml		10-2、10-3
6	稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿，作为阴性对照组。

结果显示：对于金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌和白色念珠菌第一组，第二组和第四组都无菌生长，第3组和第五组数据差不多，从数据上看，1%卵磷脂+0.1%吐温80无法中和75%酒精，75%酒精无法杀死枯草芽孢杆菌。
我想咨询以下问题：
1.有没有人做过这个验证，中和剂用的是什么？
2.做中和剂验证时需要所选菌种，每一种菌都做一遍吗？比方说知道75%酒精，0.1%新洁尔灭是低效消毒剂杀不死芽孢菌，试验是还需要做吗？我需要验证5种消毒剂，现在的操作是每种消毒剂对应4种菌，做成了20个组合，这个工作量特别大，有必要这么做吗？如果一种消毒剂用一种菌来做，比方说75%酒精+金葡+相应的中和剂这么一组的结果来说明中和剂是否有效，这样可行吗？
3.我才做到中和剂鉴定，目前75%酒精对应1%卵磷脂+0.1%吐温80结果无效，还有做了0.1%新洁尔灭，0.5%醋酸氯已定对应1%卵磷脂+0.1%吐温80，84和次氯酸钠用了0.05%硫代硫酸钠，这些结果还没出，结果出来我在继续问问题。

LaI婷1

给你参考一下，希望对你有帮助
中和剂只做了三种菌：
微生物以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表；大肠杆菌作为细菌繁殖体中肠道菌的代表；白色念珠菌作为致病性真菌的代表。
中和剂：3%吐温80+0.3%卵磷脂
确定所选中和剂是对试验用菌种是否有毒性或不良影响。细菌用TSA培养基计数，霉菌及酵母菌用SDA培养基计数。
试验设计
组号        试验内容        作用时间        目的
1        染菌载体+中和剂        10min        考查中和剂对试验菌是否有抑制作用
2        染菌载体+中和产物        10min        考查中和剂的中和效果
3        染菌载体+稀释液        10min        阳性对照
4        中和剂+稀释液        10min        阴性对照
实验组加了枯草芽孢杆菌和环境菌，消毒剂是75乙醇和0.1%新洁尔灭和5%甲酚皂就三个

呃……验证方案我好像发不出来

山顶洞人

LaI婷1 发表于 2020-5-20 14:50
给你参考一下，希望对你有帮助
中和剂只做了三种菌：
微生物以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体中化脓性球菌 ...

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LaI婷1

原来只能发PDF

sunli0710

LaI婷1 发表于 2020-5-20 15:21
原来只能发PDF

谢谢，看到了中和剂是蛋白胨：吐温80：卵磷脂：纯化水10:30:3:957，加蛋白胨是为了什么？这个确定能中和消毒剂？
不锈钢和彩钢板怎么剪成1cm*1cmde 小方格的？我这边做不到，所以计划用大的材料画出相应的面积用棉签涂抹采样。
酒精杀不死枯草芽孢杆菌，还要进行试验吗？

konggejianaka

1、中和剂作用：中和消毒剂的杀菌作用，待达到规定杀菌时间时，加入中和剂停止消毒剂继续杀菌，以评价消毒剂在规定时间内的杀菌效果，防止因试验操作延迟，导致个别实验组消毒剂杀菌时间超过规定时间，而影响杀菌效果评价（相当于“假阴性”结论）。
2、做中和剂验证时所选菌种：选择具有代表性的菌种即可，消毒剂是每种都要做的；中和剂效果确认试验是较大的工作量。
3、“中和剂鉴定”？  中和剂是消毒方案制定前，应有理论指向选择哪种中和剂更可靠，然后再做中和剂效果确认。你的“鉴定”也是这个意思吧？

sunli0710

konggejianwjx 发表于 2020-5-21 09:20
1、中和剂作用：中和消毒剂的杀菌作用，待达到规定杀菌时间时，加入中和剂停止消毒剂继续杀菌，以评价消毒 ...

是的，我是参考别人的文件，选用了相应的中和剂，但从结果上看，该中和剂不能中和消毒液，中和剂和消毒液1:1混合后的中和产物依然有消毒作用，对金葡、大埃和白念都能杀死，75%乙醇用的中和剂是1%卵磷脂+0.1%吐温80，不知道什么地方出现了问题

konggejianaka

sunli0710 发表于 2020-5-21 13:30
是的，我是参考别人的文件，选用了相应的中和剂，但从结果上看，该中和剂不能中和消毒液，中和剂和消毒液 ...

中和剂选择，最好先咨询下消毒剂供应商，一般都有推荐的中和剂和中和方法。

4587999

sunli0710 发表于 2020-5-21 13:30
是的，我是参考别人的文件，选用了相应的中和剂，但从结果上看，该中和剂不能中和消毒液，中和剂和消毒液 ...

GB 15981中规定用1:9的消毒剂：中和剂，制成中和产物，你加的明显过少，中和效果达不到。

2130346139

谢谢谢谢谢谢谢谢

没那么一波简单@

看下合适学习

死库水

中低效消毒剂是搞不死芽孢的，所以兄弟你75%乙醇灭不了枯草芽孢是正常的；
菌种选择没有强制规定，但应当选择有代表性的，一般来说就是参考药典里的5种控制菌，但实际可以根据评估缩减到金球菌，白色念珠菌，大肠杆菌。选用的中和剂可以参考：GB∕T 38502-2020 消毒剂实验室杀菌效果检验方法选用。
你看的中和剂配比可能是某些人的论文，某些人的论文有水不能重复也是可能的。一般75%乙醇及大多数（不含氯）的我都用1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80这配方。

死库水

sunli0710 发表于 2020-5-21 09:16
谢谢，看到了中和剂是蛋白胨：吐温80：卵磷脂：纯化水10:30:3:957，加蛋白胨是为了什么？这个确定能中和 ...

不锈钢和彩钢板他们的是建厂时留的样品吧，至于10mm*10mm没啥强制规定，只是这大小各种培养皿都放得下。载片材料没强制规定的，你可以选择有代表性的不锈钢，也可以直接买脱脂棉布，甚至真实一点说，305不锈钢侵染要麻烦的多，很可能干后达不到10^7这一级别。而且也没规定一定得采用载体浸泡/接擦拭法，你用悬液定量法也可以得

xiaotong803

感谢专家的经验分享。

XSQ4488

大家好，我们也正在进行酸酚消毒剂效果确认，中和剂初筛时筛选出来的中和剂进入中和剂鉴定时，345组都符合要求，就是第2组总是无菌生长，感觉是消毒剂已经把加进去的菌杀灭完了，再加入中和剂也没办法拯救了，但是消毒剂技术规范里面又规定了作用时间，没办法缩短时间，急求如何进行该实验啊？

Ruminate001

向各位有经验的前辈学习

雪梨小姐

4587999 发表于 2020-10-14 10:44
GB 15981中规定用1:9的消毒剂：中和剂，制成中和产物，你加的明显过少，中和效果达不到。

15981里面规定的0.1%吐温80对75乙醇和新洁尔灭没中和效果，0.5%硫代硫酸钠对84消毒液也没效果，为什么呢

18804303495

XSQ4488 发表于 2022-2-22 11:29
大家好，我们也正在进行酸酚消毒剂效果确认，中和剂初筛时筛选出来的中和剂进入中和剂鉴定时，345组都符合 ...

您好，我现在做也是第二组总是无菌生长，您是怎么解决的呢

古娜拉黑暗之神

死库水 发表于 2021-8-24 16:15
中低效消毒剂是搞不死芽孢的，所以兄弟你75%乙醇灭不了枯草芽孢是正常的；
菌种选择没有强制规定，但应 ...

哥  我们要邻苯二甲醛消毒，消毒后做浸提，中和剂是在浸提的时候加还是过滤的时候加进去啊

古娜拉黑暗之神

konggejianaka 发表于 2020-5-21 09:20
1、中和剂作用：中和消毒剂的杀菌作用，待达到规定杀菌时间时，加入中和剂停止消毒剂继续杀菌，以评价消毒 ...

哥  我们要邻苯二甲醛消毒，消毒后做浸提，中和剂是在浸提的时候加还是过滤的时候加进去啊