薄膜过滤法实验过程问题，老哥们帮帮我

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 08:43:19

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描述：第一次试验将产品振荡，浸提，然后薄膜过滤，重复四遍，第五遍将产品直接覆盖在培养基上，结果前四遍基本没有长菌，直接覆盖边缘长满了菌落（平行五个样品都是这样）；第二次实验加大了缓冲液的浸提量，方法同上，结果每一遍过滤的滤膜，滤膜上都基本上没有什么菌，但是每一遍的滤膜边缘都长满了菌。
综合考虑问题如下：1.我这种制备供试液方法是不是证明不适用，微生物洗不出来 2.边缘长菌是不是因为我没有过滤彻底或者说微生物限度仪没有清洗管道 3.我们产品是一种生物可吸收材料，内部纤维结构堆积致密，但是难以找到溶掉它的无毒溶剂，因此这种还有什么办法制备供试液

跪求帮助

好的 · 发表于 2020-7-6 11:53:46

被帅与丑交错一发表于 2020-7-6 11:28
对的老师，旋涡混合器来振荡，没个10min振荡1min，共三次

10min还是1min，加大频率和时间试试，还有膜边缘长你在每次过滤样品后，再用空白冲洗液冲洗2-3次，看能不解决膜边缘问题。每次实验前后，都应该用消毒液把管道冲洗一遍

九月的风筝 · 发表于 2020-7-6 08:45:31

空白对照怎么样？这种是不是过滤过程密封不好，泄露了

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 08:59:29

九月的风筝发表于 2020-07-06 08:45
空白对照怎么样？这种是不是过滤过程密封不好，泄露了

空白对照没有任何菌生长

来自苹果APP客户端

永恒12 · 发表于 2020-7-6 09:23:00

你们这产品如果不能溶解于液体中，那就你们产品特性来说，不适用薄膜过滤的方法，或者说你的供试液制备处理方法不适用。

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 09:35:11

永恒12 发表于 2020-07-06 09:23
你们这产品如果不能溶解于液体中，那就你们产品特性来说，不适用薄膜过滤的方法，或者说你的供试液制备处理方法不适用。

根据产品的纤维致密结构来看，是不是存在里面的微生物浸提不出来

来自苹果APP客户端

永恒12 · 发表于 2020-7-6 09:43:39

很大可能哦，在加工过程中被致密的纤维包裹在产品内部，常规方法难以浸提出来

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 09:50:34

永恒12 发表于 2020-7-6 09:43
很大可能哦，在加工过程中被致密的纤维包裹在产品内部，常规方法难以浸提出来

这种该怎样浸提呢，是不是剪碎真的会好一些

zh11314 · 发表于 2020-7-6 10:03:36

每次都换贴滤膜的基座还是用火烤？没除菌完全，边缘长菌？

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 10:14:11

zh11314 发表于 2020-7-6 10:03
每次都换贴滤膜的基座还是用火烤？没除菌完全，边缘长菌？

对的用火烤

迷之久远 · 发表于 2020-7-6 10:43:01

选用空白或灭菌的产品，与样品同法操作一次，作为阴性对照。如阴性对照均不长菌，为采样方法不适用。使用剪碎、粉碎或溶融、超声处理等方法尝试。

好的 · 发表于 2020-7-6 10:47:26

做初始污染菌吗？振荡的方法是什么？

zh11314 · 发表于 2020-7-6 11:00:13

被帅与丑交错一发表于 2020-7-6 10:14
对的用火烤

最开始的贴膜的基座是灭菌后开始用的吧，那先做样品，最后做空白对照，看空白贴膜边缘长菌不

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 11:06:37

zh11314 发表于 2020-7-6 11:00
最开始的贴膜的基座是灭菌后开始用的吧，那先做样品，最后做空白对照，看空白贴膜边缘长菌不

嗯呢老师，理论上出现这种边缘长菌一般会有什么情况呢

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 11:28:11

好的发表于 2020-7-6 10:47
做初始污染菌吗？振荡的方法是什么？

对的老师，旋涡混合器来振荡，没个10min振荡1min，共三次

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 11:29:23

迷之久远发表于 2020-7-6 10:43
选用空白或灭菌的产品，与样品同法操作一次，作为阴性对照。如阴性对照均不长菌，为采样方法不适用。使用剪 ...

老师漩涡混合器振荡和超声区别大不大

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 11:29:48

zh11314 发表于 2020-7-6 11:00
最开始的贴膜的基座是灭菌后开始用的吧，那先做样品，最后做空白对照，看空白贴膜边缘长菌不

好的我试试

永恒12 · 发表于 2020-7-6 11:32:19

被帅与丑交错一发表于 2020-7-6 09:50
这种该怎样浸提呢，是不是剪碎真的会好一些

这个就不知道哦，要你们自己去试了

好的 · 发表于 2020-7-6 11:55:25

好的发表于 2020-7-6 11:53
10min还是1min，加大频率和时间试试，还有膜边缘长你在每次过滤样品后，再用空白冲洗液冲洗2-3次，看能不 ...

在实验前先用空白冲刺夜冲洗一次，在过滤样品

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-6 12:26:41

好的发表于 2020-7-6 11:55
在实验前先用空白冲刺夜冲洗一次，在过滤样品

好的我试试