灭菌条件的疑惑

hangzhouhdjy

大家好，请教一下：


对于已配制好的PH6.0 PBS(磷酸盐缓冲液)进行灭菌，我看到中国药典2020版四部的通则3408(抗生素残留检查法)提到，灭菌条件为121℃、30min。


市面上在售配制好的各种不同PH的PBS，灭菌条件有121℃、15min，有0.22μm过滤器除菌，结合药典2020版四部通则8004(缓冲液)提到的各类磷酸盐缓冲液，当中所含的成分基本是磷酸氢二钠/钾、磷酸二氢钠/钾、氯化钠等，这些成分都是盐类，稳定性很好，不同的灭菌方式对于缓冲液的性能影响不会太大。


121℃、15min一般是脉动真空灭菌器的液体程序的参数，121℃、30min一般是立式压力蒸汽灭菌器的参数。药典2005版附录IXA里面就提到了抗生素残留检查法，我判断是脉动真空灭菌器在2005年那会儿，使用情况并不广泛，液体程序灭菌的参数(121℃、15min)自然也不多见，当时基本都是采用立式压力蒸汽灭菌器来灭菌的，即121℃、30min。之后的药典2010版、2015版、2020版都没有修订过抗生素残留检查法这个内容，灭菌条件就一直维持着了。


我的疑惑是：既然PBS的成分都差不多，市面上在售的配制好的缓冲液，灭菌条件都有很多种，是否意味着可以直接参考别的灭菌条件，而不是必须照搬抗生素残留检查法当中的灭菌参数(121℃、30min)，来对已配制好的PH6.0 PBS(磷酸盐缓冲液)进行灭菌?


请多多指教，谢谢！

死库水

药典不是法规哦，可以选择过滤也可以灭菌。理论上灭菌时间就是菌种被灭时间X2。F0值也不是必须的，国外就早期版本提到。有其他控制措施哪怕灭菌时间少于8分钟也OK哦，比如加入某微量毒药。一般来说F0＞12就算过杀灭了，下降12个单位，不是人为整基本不可能达到这个量级

ta1053

1.121℃的情况下，灭菌时间是15min还是30min，我认为与灭菌器的形式关系不大，在保温保压的情况下，是不是脉动真空，应该不会有太大差距；
2.PBS缓冲液本身比较干净，装量比较少的情况下灭菌，121℃，15min问题不大；装量大，会存在风险。
3.不想被挑战，121℃，30min；想省时间，做验证

BOBO1899

灭菌条件有很多种，都需要经过验证的，理论上100度维持一定的时间，也可以达到灭菌效果的，关键是看F0值。

拾光123

如果你是按照 中国药典2020版四部的通则3408(抗生素残留检查法) 的方法去做检验，建议你就按照这里面说的灭30分钟。不过你最好购买30分钟灭菌的产品，省的老师对这个差异对PBS的影响提出质疑。当然你如果有验证说话，那我觉得一切不是问题。
如果你是干其他事情，那我觉得按照产品说明进行灭菌比较好。

死库水

BOBO1899 发表于 2021-9-16 08:36
灭菌条件有很多种，都需要经过验证的，理论上100度维持一定的时间，也可以达到灭菌效果的，关键是看F0值。

沸水那个时间可不止一点点，6个小时起步吧

hangzhouhdjy

ta1053 发表于 2021-9-15 14:12
1.121℃的情况下，灭菌时间是15min还是30min，我认为与灭菌器的形式关系不大，在保温保压的情况下，是不是 ...

PH6.0 PBS(磷酸盐缓冲液)我几乎都是用在抗生素残留的检测上，用量只有5ml。
我都想过，用过滤除菌的方法来灭菌，现配现滤现用。
将过滤后的缓冲液，接种TSA和SDA平皿，检测细菌和真菌，平皿不长菌我认为就没问题。直接卖瓶装液体缓冲液的厂家，也是用过滤除菌的多。

hangzhouhdjy

拾光123 发表于 2021-9-16 10:01
如果你是按照 中国药典2020版四部的通则3408(抗生素残留检查法) 的方法去做检验，建议你就按照这里面说的灭 ...

目前市面上的商品化瓶装液体PBS，几乎都是过滤除菌的多，也有部分是121℃、15min灭菌。
至于121℃、30min灭菌的，没找到商业化的产品。

hangzhouhdjy

死库水 发表于 2021-9-16 18:00
药典不是法规哦，可以选择过滤也可以灭菌。理论上灭菌时间就是菌种被灭时间X2。F0值也不是必须的，国外就早 ...

脉动真空灭菌器，用液体程序来灭菌一般的液体培养基、琼脂培养基、一般的溶液，做设备验证的时候，F0值都有28左右，的确是>12。

桥导

死库水 发表于 2021-9-16 18:00
药典不是法规哦，可以选择过滤也可以灭菌。理论上灭菌时间就是菌种被灭时间X2。F0值也不是必须的，国外就早 ...

请问下F0是什么指标

死库水

桥导 发表于 2022-3-26 09:21
请问下F0是什么指标

额，通俗一点，相当于达到121℃的时间

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