细胞制品无菌检查用接种法还是过滤法

xbwwsq

药品质检小白请教各位大佬，1. 细胞制品无菌检查是用接种法还是薄膜过滤法

2. 因成品含有DMSO，如果使用接种法如何证明DMSO的抑制作用
3. 薄膜过滤法是过滤上清还是整个细胞悬液，如果是细胞悬液的话很容易堵滤膜导致过滤不畅
4. 无菌检查环境在B级环境下的生物安全柜中操作可以吗，还是必须用隔离器，C级下的生物安全柜可以吗？
5. 药典要求操作过程中环境需要监测，是必须在线实时监测还是操作前和操作后检测呢，悬浮粒子、沉降菌、浮游菌三项均检测吗

小白问题有点多，还请各位大佬帮忙

墨石

还没人回答呢？

姣妹崽

1.薄膜过滤法在细胞制剂上应用可能存在一定的局限性，一方面是你提的问题3，用上清还是细胞悬液，另一方面，薄膜过滤法的样品量可能会稍微多一点点。
2.回答不了，静等大佬答复
3.薄膜过滤法实在要使用，应该还是用上清，可能需要把细胞碎片反复洗涤几次。
4.理论上B+A或者封闭的C+A。详见中国药典第四部9203 药品微生物实验室质量管理指导原则，微生物实验的各项工作应在专属的区域进行，以降低交叉污染、假阳性结果和假阴性结果出现的风险。无菌检查应在隔离器系统或B 级背景下的A 级单向流洁净区域中进行，微生物限度检查应在不低于D 级 背 景 下 的 生 物 安 全 柜 或 B级洁净区域内进行。 A 级 和 B 级区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器（ HEPA)。
5.悬浮粒子需要在线实时监测，GMP无菌附录第十条 在关键操作的全过程中，包括设备组装操作，应当对A级洁净区进行悬浮粒子监测。第十一条  应当对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。

xbwwsq

姣妹崽 发表于 2022-8-31 17:20
1.薄膜过滤法在细胞制剂上应用可能存在一定的局限性，一方面是你提的问题3，用上清还是细胞悬液，另一方面 ...

感谢感谢，茅塞顿开

nilou

姣妹崽 发表于 2022-8-31 17:20
1.薄膜过滤法在细胞制剂上应用可能存在一定的局限性，一方面是你提的问题3，用上清还是细胞悬液，另一方面 ...

无菌检测的在线粒子监控没有要求吧？

wenzhao10

1、选用那种方法就要看你给到的样品多少，如果多，可以选用薄膜过滤，如果少选用直接接种，看实际工艺（直接接种方法简单）
2、需要算出DMSO的浓度，考虑单独做DMSO的方法适用性试验，最好是浓度高于实际成品中的含量
3、在实际的生产中很少会给到带细胞的悬液，一般生产工艺用上清代替，因为在做验证时不可能有太多的样品供方法适用性，这是细胞产品的特殊性，而且在实际中每批样品都没有可比性（细胞浓度不一样）
4、必须是B+A，药典有规定，或者是隔离器
5、沉降菌是检验全过程，粒子和浮游、表面可以在实验之后

风起之时

关于细胞治疗产品的无菌检检测方法，参考目前已上市的某款Car-T产品，可选择采用快速无菌检测法，直接接种的方式，培养周期为7天。具体验证要求可以参见2022年06月28日全国团体信息平台发布的团体标准《细胞和基因治疗产品快速无菌检查法的验证技术要求》（T/SHPPA 012-2022）。

白无鸢

wenzhao10 发表于 2022-9-1 16:19
1、选用那种方法就要看你给到的样品多少，如果多，可以选用薄膜过滤，如果少选用直接接种，看实际工艺（直 ...

你都是高手啊

Haoim1

楼主，我也想请教一下这个问题，现在有新的建议吗？

Haoim1

姣妹崽 发表于 2022-8-31 17:20
1.薄膜过滤法在细胞制剂上应用可能存在一定的局限性，一方面是你提的问题3，用上清还是细胞悬液，另一方面 ...

直接接种上清对于贴壁细胞相对通用，如果是悬浮细胞呢？离心取上清的无菌检查是否有代表性，请教一下版主

姣妹崽

Haoim1 发表于 2023-8-17 16:23
直接接种上清对于贴壁细胞相对通用，如果是悬浮细胞呢？离心取上清的无菌检查是否有代表性，请教一下版主

《细胞类制品微生物检查法》

这个文件里的描述是这样的：[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]供试品应能代表细胞产品的所有组分，并从成品中取样。如成品取样不适用，可采用替代取样方案，如选取在处理细胞最后接触的液体中取样。采用本法进行生产过程的中间质控时，应从相应质控点取样。

从这个上面来说我觉得是需要用细胞悬液的。

姣妹崽

Haoim1 发表于 2023-8-17 16:23
直接接种上清对于贴壁细胞相对通用，如果是悬浮细胞呢？离心取上清的无菌检查是否有代表性，请教一下版主

待我去学习一下再来详细回复

sd2789390

Haoim1 发表于 2023-8-17 16:23
直接接种上清对于贴壁细胞相对通用，如果是悬浮细胞呢？离心取上清的无菌检查是否有代表性，请教一下版主

我个人认为还是取细胞悬液进行直接接种更好些，其实终产品在出厂检验时也会面临这个问题

Haoim1

姣妹崽 发表于 2023-8-17 17:26
《细胞类制品微生物检查法》

这个文件里的描述是这样的：供试品应能代表细胞产品的所有组分，并从成品 ...

谢谢版主，悬浮细胞无菌检查用直接接种法经常会出现干扰判断的不明絮状物，摇不散，不变浑浊，所以在考虑是否能用上清替代

Haoim1

sd2789390 发表于 2023-8-18 10:05
我个人认为还是取细胞悬液进行直接接种更好些，其实终产品在出厂检验时也会面临这个问题

细胞悬液接种是最有代表性的，但是大密度悬浮细胞直接接种可能会影响结果判断，

sd2789390

Haoim1 发表于 2023-8-18 14:30
细胞悬液接种是最有代表性的，但是大密度悬浮细胞直接接种可能会影响结果判断，

这个确实会对结果判定产生干扰，如果你的细胞密度非常大，可考虑让细胞自然沉降后，取上清采用薄膜过滤法进行无菌检查，这样可以加大样本量，减小风险.

4587999

直接接种法，培养后镜检等方法确认。

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直接接种，接种量不高的话，DMSO没有抑制（先做个方法适用性确认下）