细胞株筛选，Pool细胞fed-batch过程中titer D5后逐渐下降

PGYPGYPGY2021

补充:摇瓶培养，中间过程每天有补料和补糖。分子为单抗。
什么原因？

来自安卓APP客户端

陈凯1234567

可以考虑蛋白不稳定原因，比如形成多聚体沉淀，可溶性蛋白浓度自然就会越来越低。可能也有其他原因，不过就要对细胞或者上清进行检测具体分析了。

PGYPGYPGY2021

陈凯1234567 发表于 2023-02-24 09:49
可以考虑蛋白不稳定原因，比如形成多聚体沉淀，可溶性蛋白浓度自然就会越来越低。可能也有其他原因，不过就要对细胞或者上清进行检测具体分析了。

好，收到，谢谢！

来自安卓APP客户端

PGYPGYPGY2021

陈凯1234567 发表于 2023-02-24 09:49
可以考虑蛋白不稳定原因，比如形成多聚体沉淀，可溶性蛋白浓度自然就会越来越低。可能也有其他原因，不过就要对细胞或者上清进行检测具体分析了。

看SEC有一点聚体，不到2%，这是能测出来的。如果有聚体沉淀，那这问题比较大。有没有什么办法能得到培养液总蛋白，或分离出蛋白？

来自安卓APP客户端

陈凯1234567

PGYPGYPGY2021 发表于 2023-2-25 12:39
看SEC有一点聚体，不到2%，这是能测出来的。如果有聚体沉淀，那这问题比较大。有没有什么办法能得到培养 ...

聚体2%应该不至于会引起titer明显下降。你的样品应该是上清液吧，还有一种可能，那就是有些高聚体已经形成不容物，离心沉淀下来了？如果要验证的话，可以看看沉淀中除了细胞，是否有些其他的不规则大小的颗粒。可以用显微镜粗略看看，也可以跑个胶看看。

PGYPGYPGY2021

陈凯1234567 发表于 2023-03-01 16:07
聚体2%应该不至于会引起titer明显下降。你的样品应该是上清液吧，还有一种可能，那就是有些高聚体已经形成不容物，离心沉淀下来了？如果要验证的话，可以看看沉淀中除了细胞，是否有些其他的不规则大小的颗粒。可以用显微镜粗略看看，也可以跑个胶看看。

样品是上清。
想法很好！我们去用显微镜看看，跑胶试试。

来自安卓APP客户端