蛋白质互作介绍

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蛋白质互作介绍

蛋白相互作用的原理：蛋白质是生命体内最重要的分子之一，它们具有控制生物体内的各项生理过程。蛋白质之间的相互作用，是构成细胞功能的基础。

利用转录因子的结构域与两种不同的蛋白质相结合，当两种蛋白质之间能够相互作用，那么转录因子的结构域就可以相结合，根据检测确定是否有目标产物形成，就可以判断出两种蛋白质之间是否存在相互作用。

蛋白相互作用的作用：深入了解蛋白互作可以了解细胞内的调控机制、药物研发以及疾病治疗等功能，为药物开发提供新的靶点和治疗策略。

蛋白互作验证方法：

1、免疫共沉淀法：

利用特异性抗体与目标蛋白结合，采用磁珠或琼脂糖颗粒等材料沉淀出蛋白质的复合物。鉴定出蛋白质之间的相互作用，接近天然相互作用，符合体内的真实情况，是蛋白互作验证的重要手段。

2.酵母双杂交法：

利用酵母细胞中的两个蛋白质互作引发的报告基因表达。酵母方法可以大规模筛选蛋白互作，实现快速鉴定出蛋白质相互作用。

3.共定位：

利用荧光显微镜技术观察蛋白质的定位，通过相同位置上出现的蛋白质来推断出蛋白质之间的相互作用关系。

实验常见问题：

蛋白亲和力弱：使用DSS交联

蛋白假阳性：添加对照组，选择特异性高的抗体，增加洗涤次数

蛋白筛选较少：采用组学分析

目的蛋白高背景：增加去污剂量，增加膜的封闭时间

受重链、轻链影响：WB中用特异性二抗去排除

目的蛋白降解：添加蛋白酶抑制剂，在4℃以下进行实验操作。

抗体亲合力较低：换抗体

蛋白易变性：更换温和的裂解液