关于生孢梭菌部分疑问

1160471779 · 发表于 2024-5-7 16:59:37

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各位老师，我最近买了甘油生孢梭菌菌液，是第三代菌，准备进行培养基灵敏度、方法适用性试验，因为没有厌氧培养箱，准备直接用ftm进行计数1、买来的甘油生孢梭菌是不是要先接种至FTM中活化，培养一天，次日将培养好的菌吸取一毫升，稀释至各个倍数，然后接种至FTM中培养数条状物？
2、因为没有庖肉培养基，我接种至FTM的生孢梭菌是否可以加一层甘油封住，然后放在4℃冰箱里备用，还是说只能每次要用都重新活化培养？
3、由于移液枪损坏，接种时能否用一次性无菌注射器或接种环？
麻烦各位老师解答万分感谢！

1160471779 · 发表于 2024-5-7 17:38:25

还有就是哪个福州企业需要生孢梭菌吗ATCC第三代我买来做毕业设计的做完就没用了也没地方保存无偿

juanx · 发表于 2024-5-8 09:27:09

1. 能做，但不太好数，考眼力。
2 保存菌种在4℃冰箱中，限24小时内使用，药典规定的。
3 接种能用一次性无菌注射器。

1160471779 · 发表于 2024-5-8 09:35:38

juanx 发表于 2024-5-8 09:27
1. 能做，但不太好数，考眼力。
2 保存菌种在4℃冰箱中，限24小时内使用，药典规定的。
3 接种能用一次性 ...

非常感谢老师解答，关于第二点我还有些疑问：我制备好的菌要如何保存才能延长备用时间，因为我刚做计数，后续还有方法适用性试验，所以试验时间可能会比较长些

devoter2000 · 发表于 2024-5-8 09:39:53

应该通过平皿培养进行计数

devoter2000 · 发表于 2024-5-8 09:40:16

没有厌氧箱，可购买厌氧袋

春夏秋冬12345 · 发表于 2024-5-8 09:44:05

1160471779 发表于 2024-5-8 09:35
非常感谢老师解答，关于第二点我还有些疑问：我制备好的菌要如何保存才能延长备用时间，因为我刚做计数， ...

用FT进行复苏复壮，可以取菌液跟甘油按比例混合，-20℃保存。

春夏秋冬12345 · 发表于 2024-5-8 09:45:13

计数可以用哥伦比亚琼脂加厌氧包

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-8 10:31:35

1、计数可以使用厌氧包+TSA或哥伦比亚琼脂，也可以使用FTM,不过需要双倍琼脂浓度，可以直接数菌落的，我们使用的就是FTM，
2、看你买的是什么菌，如果是商业定量菌株，那就不能作为传代使用，只能直接使用。如果是可以传代的菌株，储存在2-8℃，一般可以保存一个月左右，使用前需要重新接种活化。
3、接种可以使用一次性注射器

1160471779 · 发表于 2024-5-8 11:14:57

devoter2000 发表于 2024-5-8 09:40
没有厌氧箱，可购买厌氧袋

感谢老师解答

1160471779 · 发表于 2024-5-8 11:20:25

春夏秋冬12345 发表于 2024-5-8 09:44
用FT进行复苏复壮，可以取菌液跟甘油按比例混合，-20℃保存。

好的好的感谢老师

1160471779 · 发表于 2024-5-8 16:57:29

八档丶电风扇发表于 2024-5-8 10:31
1、计数可以使用厌氧包+TSA或哥伦比亚琼脂，也可以使用FTM,不过需要双倍琼脂浓度，可以直接数菌落的，我们 ...

感谢老师！因为我是刚开始接触这一方面，所以还有些疑问：
1、加琼脂是为了让流体培养基变成固态后方便计数吗？
2、我能否直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存？计数完就直接进行方法适用性试验能来得及吗
3、能否用FTM加琼脂配置成固体斜面培养基，接种培养后用液体石蜡封住备用？
恳请老师解答

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-8 18:23:01

1160471779 发表于 2024-5-8 16:57
感谢老师！因为我是刚开始接触这一方面，所以还有些疑问：
1、加琼脂是为了让流体培养基变成固态后方便 ...

1.是的、不过是半固态，
2.可以直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存，
一般我们拿来储存的FTM如果是低温保存的话，传代培养结束后直接液封保存，实验使用的和保存的要分开传代，计数完就直接进行方法适用性试验能来得及，我们日常的操作就是菌种稀释后接种至样品、接种完才进行菌落计数，一般从开始稀释到接种至培养基不超过2h就不会有什么问题。
3、FTM加琼脂配置成固体斜面培养基，接种培养后用液体石蜡封住备用，这个操作没试过，不过琼脂浓度太高也不行的，太高可能会影响氧化层的形成，可能会导致厌氧菌死亡，生孢的保存就拿正常的FTM就好了，如果想长期保存、就用20%甘油冻存管-30℃以下保存

1160471779 · 发表于 2024-5-8 19:25:24

八档丶电风扇发表于 2024-5-8 18:23
1.是的、不过是半固态，
2.可以直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存，
一般我们拿来储存的F ...

非常感谢老师解答！！非常清楚明了

1160471779 · 发表于 2024-5-9 15:55:05

八档丶电风扇发表于 2024-5-8 18:23
1.是的、不过是半固态，
2.可以直接将接种于FTM的那一管生孢用液体石蜡液封保存，
一般我们拿来储存的F ...

老师您好为什么我培养的生孢梭菌FTM培养基氧化层部分都没了

，我想用FTM计数，发现变成这样了，是不是被别的菌污染了呀

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-9 16:19:23

1160471779 发表于 2024-5-9 15:55
老师您好为什么我培养的生孢梭菌FTM培养基氧化层部分都没了，我想用FTM计数，发现变成这样了 ...

这个样子是培养时间太长，菌太多了，氧化层所以没有了
1、生孢计数培养时间一般控制在16-20h左右，时间太长容易整支管浑浊
2.稀释的时候要稀释好、计数结果最好在50cfu以下

1160471779 · 发表于 2024-5-9 16:35:01

八档丶电风扇发表于 2024-5-9 16:19
这个样子是培养时间太长，菌太多了，氧化层所以没有了
1、生孢计数培养时间一般控制在16-20h左右，时间 ...

非常感谢老师！！有可能我复苏的时候吸太多菌液了我再做一次稀释看会不会好一些真的非常感谢！！

火舞精灵 · 发表于 2024-5-9 16:38:47

生孢梭菌在半流体硫乙醇酸盐液体培养基中可以计数，日常使用的流体硫乙醇酸盐培养基加琼脂，这种方式计数下的菌落生长表观为米粒状，很容易计数的

1160471779 · 发表于 2024-5-9 16:50:25

好的好的非常感谢老师解答，老师您的琼脂是买的哪一家我能问一下吗，还是说在淘宝上随便找一家买就行，我这里目前没有琼脂，然后琼脂的量和FTM比例大概是多少？

1160471779 · 发表于 2024-5-9 16:53:03

火舞精灵发表于 2024-5-9 16:38
生孢梭菌在半流体硫乙醇酸盐液体培养基中可以计数，日常使用的流体硫乙醇酸盐培养基加琼脂，这种方式计数下 ...

好的好的非常感谢老师解答，老师您的琼脂是买的哪一家我能问一下吗，还是说在淘宝上随便找一家买就行，我这里目前没有琼脂，然后琼脂的量和FTM比例大概是多少？

[无菌&限度检查] 关于生孢梭菌部分疑问

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