HCD及HCP残留方法概述

BLA小助手

作者：斯坦德生物医药（BLA会员单位）

一、前言

对于各类重组DNA蛋白制品、生物发酵来源原料药而言，纯度是产品的关键质量属性（CQA）之一。而这些产品往往是在各类宿主（细胞，组织，菌种等）中表达后提取而来，由于其来源基质的复杂性和当下纯化工艺的限制，不可避免地会往目的蛋白中引入各类含量不一的宿主蛋白（HCP）、核酸（HCD），从而影响产品纯度。作为生物制品中的非目标成分，HCP和HCD可能引发机体未知的免疫应答而影响生物制品的功效，甚至引起超敏反应或其他不良反应，因此在原液水平对其含量进行控制是很重要的。国际人用药品技术要求协调理事会（ICH）指南：ICH Q6B指出，需要根据ICH准则采用敏感且经过验证的有效方法来监控残留的HCP及HCD，其残留量在各国药典法规中也通常要会有相应规定[1]。

二、HCP检测方法概述

在中美各国法规中，均将HCP定义为工艺相关杂质。

• 美国药典USP<1132>章节规定：用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCP，其含量应该低于检测限(通常小于100ppm，即1mg总蛋白中HCP含量应小于100ng，也即<0.01%)[2]。
• 欧洲药典EP 2.6.34中规定：在生物制品中，HCP的含量应当小于0.1%[3]。
• 《中国药典》三部(2020版)规定：针对CHO细胞，HCP残留需要<0.05%(相当于小于500ppm)：针对E.coli，HCP残留需要<0.01%。[4]
  
  

美国药典委员会（USP）发布了通则：<1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals。通则阐述了电泳法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和LC-MS/MS等方法在HCP检测的重要作用。
其中常见的ELISA法测HCP的试剂盒原理是双抗体夹心法，该方法将针对某种特定的宿主的蛋白抗体包被在微孔板上，接着加入宿主蛋白与抗体结合，再加入HRP标记的宿主蛋白抗体以形成抗体-抗原-抗体复合物。将残留蛋白洗涤干净后，即可加入TMB显色。颜色的深浅与HCP含量水平呈正相关，通过标曲外推即可得到HCP含量水平[2]。

图1：ELISA法检测药物中总HCP含量

除此之外LC-MS/MS是一种可靠的蛋白质组分析技术，具有分辨率高、准确度高的特点，能避免上述ELISA方法因试剂盒原料的不确定性[2]。可用于定性检测低含量HCP，且能通过建立菌种的谱库鉴定HCP的种类。在LC-MS/MS检测中，可以通过加入表征清楚的内标和外标蛋白，准确地分析HCPs的组成并鉴别其中高风险蛋白，与ELISA方法形成正交对照，将为药物工艺过程开发和验证提供更多依据，推进工艺优化，促进产品获批上市进程。

图2：LC-MS/MS法检测药物中HCP

三、HCD检测方法概述

此外《中国药典》三部<3407>针对HCD残留测定也提供了相应方法，主要包括DNA探针杂交法，荧光染色法和定量PCR法。其中对于选用细胞基质生产的生物制剂，其宿主DNA残留量应≤100 pg/剂：通过细菌或真菌基质生产的疫苗，其宿主DNA残留量应≤10 ng/剂[5]。

参考文献
[1] ICH Q6B Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products.

[2] USP<1132>, “Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals”.

[3] EP 2.6.34, “HOST-CELL PROTEIN ASSAYS”.

[4] 中国药典三部，冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero 细胞)。

[5] 中国药典三部，3407外源性DNA残留测定法。

关于斯坦德生物医药

斯坦德生物医药是斯坦德集团的核心领域，下设药物研发平台、中药研发平台、药学研究平台、相容性密封性研究平台、生物制品安全研究平台、药物临床前安全评价平台、药物临床研究平台、GMP验证合规平台等技术平台。我们致力于为客户提供产品研发外包、分析测试一站式服务，可有效助力企业缩短研发周期，让药品更快更安全的上市。

随着全球药物研发技术的无限深入，面对细胞基因治疗和重组DNA蛋白药物研发趋势，我们同步开发了生物大分子表征和生物安全性评价测试服务，平台设备配置精良，团队技术能力卓越，可就生物制品提供病毒清除灭活工艺验证、细胞检定、蛋白质结构表征、工艺杂质检测、mRNA表征、菌种鉴定等相关研究服务，助力全球临床及商业化细胞基因疗法项目。

关于BLA

生物制药国产化推进联合会(Biopharma Localization Association)，简称BLA，总部位于上海，成立于2021年8月，是集生物制药领域平台、媒体、研发、生产、上下游供应链等企业的联合型社团组织。

BLA致力于助推生物制药“国产化”的三个核心：

▲ 助推建立健全中国生物药政策标准

▲ 助推研发制造安全有效的中国生物药

▲ 助推做大做强中国生物药国产供应链产品和体系

全面推进中国生物医药产业高质量发展，向生物科技强国和产业强国迈进。

BLA，for Biopharma，for China.
入会咨询：张老师，13062776509（微信注明：BLA）

邮箱：blachina@ouryao.com

xqliu

学习了，谢谢提供分享。

Freyaun0

请教一下：HCP的试剂盒是否需要像cygnus在FDA备案一样，在中国的药监局备案？