纯化水微生物薄膜过滤法

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 14:25:25

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在纯化水微生物限度时遇到非常棘手的问题，我做了几批纯化水，同时又用娃哈哈纯净水同法操作，结果纯化水整张滤膜都长满了菌，而娃哈哈纯净水没长菌，我认为操作方法没问题，后来将水送到检测中心结果才28cfu/ml，再后来我一直检测还是长满了菌哪一个环节出现了问题？
操作方法:取纯化水1ml（没有稀释，没有用缓冲液冲洗）经薄膜过滤，用R2A培养基35摄氏度培养五天，
结果如图片

纯化水培养结果

同条件、同时间、同法操作娃哈哈纯净水没有长菌

greatwolf · 发表于 2024-8-28 14:42:44

你做的水，和送检测中心的水不是同一时间的，不是同一储存条件的，没有直接对比性，只有参考作用。娃哈哈的纯净水，微生物检出率确实很低很低，实验操作正确的话，不长菌也正常。

小铁犇 · 发表于 2024-8-28 14:43:02

不是同时取的水很难判断呢

156067 · 发表于 2024-8-28 14:49:29

一般得逐步排查，器具灭菌、灭完后的保护措施、取水过程、检验过程、培养基污染、培养过程，建议回忆一下细节，然后这些都没问题的话，那一般就是水质问题了

然后提个疑问

1ml没冲洗，没稀释是怎么做到润湿滤膜的？

哇哈哈是先测的还是后测的？先测的话会不会测试过程交叉污染，导致后续的都长菌了。

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 14:49:30

greatwolf 发表于 2024-8-28 14:42
你做的水，和送检测中心的水不是同一时间的，不是同一储存条件的，没有直接对比性，只有参考作用。娃哈哈的 ...

是同一时间取水，我同时做的，图片只是参考出来的结果，每一次做出来和图片都差不多

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 14:50:45

小铁犇发表于 2024-8-28 14:43
不是同时取的水很难判断呢

送检是同一时间取水，我同时做的，图片只是个例子但是我每一次做出来和图片都差不多

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 14:54:02

156067 发表于 2024-8-28 14:49
一般得逐步排查，器具灭菌、灭完后的保护措施、取水过程、检验过程、培养基污染、培养过程，建议回忆一下细 ...

娃哈哈是后测的，那正确的操作步骤是什么，要不要冲洗

jshafei · 发表于 2024-8-28 14:57:25

滤器有没有污染，培养基的问题有没有，还有1ml不冲洗可以么

机智鼠 · 发表于 2024-8-28 15:02:51

纯化水整张滤膜长满菌，可能原因有：纯化水系统存在污染源，或样品处理过程中受到污染。建议检查纯化水系统的运行状态和储存条件，确保无污染源。同时，优化样品处理流程，如增加缓冲液冲洗步骤，减少操作中的污染风险。另外，与娃哈哈纯净水的对比实验显示差异，可能是由于品牌纯净水经过严格处理和检测，突显了纯化水在处理过程中可能存在的污染问题。综上，应从纯化水系统和样品处理两方面入手，查找并解决问题。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

156067 · 发表于 2024-8-28 15:12:02

@王不留行发表于 2024-8-28 14:54
娃哈哈是后测的，那正确的操作步骤是什么，要不要冲洗

虽然药典没有强制要求，但一般都是建议冲洗的，可以帮助更好润湿整个滤膜以及微生物更均匀的分布在滤膜上。想象一下一滴水和一杯水倒在桌子上，哪个铺的更广。

然后建议有时间的话可以具体描述整个取样检测培养细节，光现有信息外人没法下结论。图1右边皿正常点，桶装那个皿更像是那种滤膜上有水微生物润开了的感觉。

thinkpower · 发表于 2024-8-28 15:30:29

个人感觉就是水不行

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:42:15

jshafei 发表于 2024-8-28 14:57
滤器有没有污染，培养基的问题有没有，还有1ml不冲洗可以么

1ml水用多少缓冲液冲洗好，在抽滤时要不要用冲洗液润湿滤膜

Qiuyang08301340 · 发表于 2024-8-28 15:43:44

要加缓冲液的，pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:44:42

156067 发表于 2024-8-28 15:12
虽然药典没有强制要求，但一般都是建议冲洗的，可以帮助更好润湿整个滤膜以及微生物更均匀的分布在滤膜上 ...

可不可以留个联系方式，向你请教

destino7 · 发表于 2024-8-28 15:46:33

5加95无菌水，混匀，然后取20呢？

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:46:51

Qiuyang08301340 发表于 2024-8-28 15:43
要加缓冲液的，pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液

1ml水用多少缓冲液冲洗较好

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:48:42

destino7 发表于 2024-8-28 15:46
5加95无菌水，混匀，然后取20呢？

这样如何计数，是5ml水加95ml无菌水，过滤在冲洗吗

Qiuyang08301340 · 发表于 2024-8-28 15:49:29

@王不留行发表于 2024-8-28 15:46
1ml水用多少缓冲液冲洗较好

我公司这边是取1ml的纯化水加入到100ml的稀释液(0.9%无菌氯化钠溶液)中，混匀，过滤制得滤膜，菌面朝上贴于R2A培养基上。

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:52:29

机智鼠发表于 2024-8-28 15:02
纯化水整张滤膜长满菌，可能原因有：纯化水系统存在污染源，或样品处理过程中受到污染。建议检查纯化水系统 ...

操作方法应该没问题，做过多次对照验证的，检测中心报告水合格，但是我做的就不合格，而且是经过多次对照试验的，公司只相信检测中心的，但是事实是我认为是菌是超标的。

@王不留行 · 发表于 2024-8-28 15:55:13

Qiuyang08301340 发表于 2024-8-28 15:49
我公司这边是取1ml的纯化水加入到100ml的稀释液(0.9%无菌氯化钠溶液)中，混匀，过滤制得滤膜，菌面朝上贴 ...

这样操作计数是直接报告菌落个数吗

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