求助——如何检测菌泥和保护剂混合的均一性

咸鱼茄子煲

活菌制剂，有个发酵离心得到菌泥，然后和保护剂混合然后上冻干机的步骤。但是这一步的检测方法采用的是多点位取样做活菌计数，一是检测时间太久，二是操作存在人为误差。想知道有没有一种可以比较快检测的方式，问问行业前辈的经验。像测密度或者吸光度这种可行吗

世间始终你好

关于有没有更**快速、稳定、自动化**一些的方法，下面是行业里常见的一些**替代或辅助策略**，分为两类来讲：


一、可行的快速检测替代或辅助方法

1. **浊度法 / 吸光度（OD）**

* **测量点位：** 可以测 OD600（或根据菌种不同调整），测混合液的浊度。
* **优点：** 快速、方便、重复性好。
* **缺点：** **不能区分死菌和活菌**，OD值和活菌数之间关系并非线性。
* **可行性：**

  * 若你的菌泥制备相对标准化（菌种纯、发酵稳定），可以**建立OD与活菌数的相关曲线**。
  * 可作为工艺控制时的快速评估指标，**用于批内一致性监控**。
  * 在确认OD和活菌数线性关系稳定前提下，OD也可在特定范围内粗略估算活菌数。

2. **流式细胞仪（Flow Cytometry）**

* 可加染料区分**死活菌**（如 PI+SYTO9）。
* 检测速度非常快（分钟级），自动化程度高。
* **缺点：** 设备价格高，操作需熟练，样品需要预处理（稀释、染色等）。
* 适合大产量工厂作为**在线监测或QC快速筛查工具**。

3. **荧光染色法 + 显微镜/图像识别**

* 用荧光染料标记活菌（如 FDA、CFDA），然后显微计数或机器识别。
* 成本略低于流式，但仍需要仪器支持。
* 可实现快速筛查、数据直观、精度相对较高。

4. **微滴数字PCR（ddPCR）或qPCR法检测特定菌DNA/RNA**

* 可用于菌种特异性活菌数检测（配合mRNA、rRNA等活性指标）。
* 技术较成熟，适合标准化流程。
* 仍然不能完全替代传统活菌计数（部分死菌也能检测到），但在定向检测方面优势明显。

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二、不建议单独依赖的指标（但可辅助）

| 方法     | 可否替代？     | 说明                        |
| ------ | --------- | ------------------------- |
| 密度（比重） | 不可独立替代   | 和菌浓度相关但不具备特异性，影响因素多       |
| pH值    | 不可用      | 发酵/混合液体的pH只能反映代谢活动，不反映活菌数 |
| 电导率    | 不可       | 只能反映溶液中离子浓度，和活菌关联小        |
| 生物传感器法 | 研究中，工业暂少见 | 如呼吸速率法，但技术尚不成熟            |

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建议的策略组合（行业通用经验）

如果你想**加快检测、减少操作误差**，可以考虑：

1. **建立 OD（或其他指标）与活菌数的相关性曲线**，用于快速预判；
2. 在冻干前工艺控制中，使用 **OD或流式细胞仪做快速检测**，只在关键点做平板法活菌计数；
3. 将传统活菌计数改成**自动平板计数仪**或**自动稀释/分注系统**，减轻人力误差；
4. 长期考虑，可探索 **荧光染色 + AI图像分析**快速定量方案。



小结

| 方法         | 可否替代平板计数 | 优点         | 缺点          |
| ---------- | -------- | ---------- | ----------- |
| 吸光度（OD）    | 部分可行   | 快速、低成本     | 无法区分死活      |
| 流式细胞仪      | 可替代部分用途 | 快、精准、可区分死活 | 设备贵、操作复杂    |
| 荧光染色       | 部分替代    | 直观、相对快     | 需染色、人工或AI识别 |
|定向替代    | 高特异性       | 无法区分死活、耗材贵  |

lipi

世间始终你好 发表于 2025-7-9 11:21
关于有没有更**快速、稳定、自动化**一些的方法，下面是行业里常见的一些**替代或辅助策略**，分为两类 ...

AI是个好东西

世间始终你好

lipi 发表于 2025-7-9 11:50
AI是个好东西

很香   

yhgz

路过学习！

洪涛

菌泥和保护剂混合，一般工艺使用乳化工艺，对乳化工艺进行验证，验证时对乳化混合液取样（取样可以涉及成上中下三层取样）进行活菌数检测，确认最佳乳化时间，进一步确认活菌数均一性

要饭讨生活

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