日志
一般项目方法学验证要求
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表一 原料药检测项目及方法学验证方案
名称 | 检测项目 | 方法学验证 |
起始原料 | 性状、溶解度、鉴别、比旋度（手性中心）、干燥失重、炽灼残渣、残留溶剂、重金属、有关物质、含量 | 残留溶剂、有关物质、含量 |
中间体 | 性状、有关物质、纯度 | 有关物质、纯度 |
API | 性状、溶解度、引湿性、熔点、比旋度（手性中心）、鉴别、干燥失重或水分、硫酸盐、氯化物、重金属、炽灼残渣、残留溶剂、粒度、晶型、有关物质、含量 | 残留溶剂、粒度、有关物质、含量 |
表二 片剂检测项目及方法学验证方案
名称 | 检测项目 | 方法学验证 |
片剂 | 性状、鉴别、水分、重量差异、有关物质、溶出度、含量均匀度、含量、微生物限度 | 有关物质、溶出度、含量均匀度、含量、微生物限度 |
表三 有关物质方法学验证内容
名称 | 有关物质色谱条件摸索 | 有关物质方法学验证 | HPLC |
起始原料 | 检测波长的初选、分离度、检测波长的确定 | 分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰 | 不加校正因子的主成分自身对照法 |
中间体 | 检测波长的初选、分离度、检测波长的确定 | 分离度、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰 | 面积归一化法 |
API | 检测波长的初选、分离度、检测波长的确定 | 分离度、强制降解试验、仪器精密度、LOD、溶液稳定性、空白干扰、耐用性 | 不加校正因子的主成分自身对照法 |
分离度、强制降解试验、系统适用性、仪器精密度、LOD、LOQ、线性、溶液稳定性、空白干扰、耐用性 | 加校正因子的主成分自身对照法 | ||
分离度、强制降解试验、系统适用性、仪器精密度、方法精密度、中间精密度、溶液稳定性、空白干扰、LOD、LOQ、线性、回收率 | 外标法 |
表四 有关物质色谱条件摸索
名称 | 试验内容 | 备注 |
检测波长的初选 | 分别取各杂质及供试品加甲醇（或乙腈）溶解并稀释制成各约含XXug/ml（一般10ug/ml）的溶液，进行UV扫描（200nm～400nm） | 溶剂：能溶解供试品或各杂质的单一溶剂（可向合成咨询溶剂及供试品或各杂质的溶解情况） 浓度：吸光度读数以在0.3～0.7之间为宜 |
色谱条件摸索（流动相、色谱柱的摸索） | 先查文献或各国药典 | API的保留时间一般在5～15min，主峰峰型好，理论板数5000以上。 API的配制浓度：根据扫描结果 |
分离度 | 分别取各杂质及供试品配成一定浓度，分别进样。 分离度溶液：配制成含API的浓度及各杂质浓度为1%（API的有关物质测定浓度）（进6针） | 杂质与主峰的分离度应大于1.5 |
检测波长的确定 | 在流动相条件下进行UV扫描 |
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表五 有关物质方法学验证具体内容
内容 | 溶液配制方法 | 溶液配制份数 | 进样针数 | 评定标准 | 备注 |
系统适用性 | 分别取供试品、各杂质适量，加流动相超声溶解，并稀释配制成约含供试品XXmg/ml和含杂质各1%（相当于供试品浓度XXmg/ml）的混合溶液作为系统适用性溶液。 | 供试液 1 份 | 进6针 | 杂质峰峰面积 RSD≤ 2.0%； 保留时间RSD ≤1.0%； 杂质峰的拖尾因子≤2.0； 分离度及理论塔板数应符合质量标准的规定 | 杂质为订入标准中的杂质 |
方法专属性 1 | 精密量取流动相 | 供试液 1 份 | 每份各 1 针 | 空白溶剂应无干扰； |
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精密度 | 在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度） |
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仪器精密度 | 供试液及自身对照液 | 自身对照液1份 | 进6针 | 峰面积 RSD≤2.0% |
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供试液仪器精密度供试液 1 份 | 进6针 | 峰面积 RSD≤2.0%； 保留时间 RSD≤1.0% |
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检测限 | 供试品或杂质适量，用流动相溶解并逐级稀释 | 供试品溶液1份 | 检测限2针； | S/N≥3或2。 | 研究的所有杂质 |
定量限 | 供试品或杂质适量，用流动相溶解并逐级稀释 | 供试品溶液1份 | 定量限6针； | S/N≥10。主成分及杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面积的相对标准差应不大于5.0%。 | 外标法测定的杂质 |
溶液稳定性 | 供试液 | 供试液 1 份 | 0、 1、2、4、6 、8、24小时各进1针 | 主成分的含量变化的绝对值≤2.0%；杂质含量的绝对值在 ±0.1％以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质，峰面积及峰面积的归一化含量 |
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耐用性 | 供试液 系统适用性溶液 | 调流动相pH变化±0.2 | 1 份供试液和1份系统适用性溶液，各条件下进 2 针 | 主峰的拖尾因子不得大于2.0； 主峰与杂质峰必须达到基线分离；主峰与杂质峰分离度符合质量标准； 各条件下的峰面积 RSD符合规定； 杂质含量的绝对值在±0.1％以内 |
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调流动相配比变化±5% |
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柱温±5℃（如有柱温） |
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不同（批号）色谱柱 |
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流速相对值变化±20％ |
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缓冲液中盐的浓度±10％ |
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方法精密度 | 供试液 杂质对照品溶液 | 供试液 6份 杂质对照品溶液1份 | 供试品进1针 杂质对照品溶液进3针 | 报告限以上的杂质个数一致，外标法计算杂质的含量，RSD不得大于15%。 |
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中间精密度 | 供试液 杂质对照品溶液 | 供试液 6份（另一个人员、不同仪器、不同时间） 杂质对照品溶液1份 | 供试品进1针 杂质对照品溶液进6针 | 报告限以上的杂质个数一致，外标法计算杂质的含量，12个数据RSD不得大于20%。 |
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线性 | 不同浓度的各杂质对照品溶液 | 至少5个浓度（LOQ～限度的150%） | 各进2针 | 相关系数（R）不得小于0.9990，Y轴截距应在100%响应值的25%以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。 |
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回收率 | 供试液 杂质对照品溶液 | 供试液9份（三个浓度：50%、限度、120%各3份） 杂质对照品溶液1份 | 供试液各进2针 杂质对照品进6针 | 各浓度下的平均回收率应在80%-120%（低浓度为定量限，放宽至70%-130%），RSD(%)不大于10.0% |
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强制降解试验 | 供试液 | 控制溶液、空白溶液、酸破坏、碱破坏、光破坏、氧化破坏、热破坏、酸碱空白溶液、氧化空白溶液 | 各进1针 | 空白不干扰降解产物的检出， |
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