含琼脂培养基的配制及pH测试

战哥的小肥兔

2020版药典“9203”要求培养基灭菌后应确定pH值。目前我们购买的是干粉培养基。之前我们是将培养基溶解后用pH试纸测试并调节pH值范围，待培养基灭菌并恢复到室温再用pH计测量。通过之前的经验，发现用pH试纸在前面调节差异挺大，特别是带颜色的培养基，不太好判断。对此我们查阅资料知道琼脂的熔点在85~95℃，所以一般含琼脂类培养基需要煮沸溶解。除此之外培养基完全溶解后在测试pH值相对来说比较准确。针对此有以下方案：方案一、将称取的干粉培养基与纯化水（冷水）搅拌均匀用pH电极测试并调节至对应pH值范围，分装，灭菌，冷却至室温再用pH计测试。
   优点：成本低（普通pH电极即可），配制小批量的培养基（如5 L以下）可操作性强；
   缺点：电极维护难度加大，配制大批量的培养基可能会导致加热时间过长，影响培养基质量（如出现水分流失，营养成分被破坏等）。
方案二、将量取的少部分纯化水（冷水）把干粉培养搅拌成稀糊状。带上防护手套及袖套，待其余纯化水预先加热至沸腾后将上述培养基加入其中，边加边搅拌，防止糊底。培养基煮沸后用耐高温电极测试pH值并 进行调节，分装，灭菌，冷却至室温，再用pH计测试。
   优点：缩短大批量培养基配制的加热时间；提升了在培养基配制过程对pH值的控制效果，避免出现灭菌后因pH值不在要求范围内销毁。
   缺点：耐高温的pH电极费用较高（1.3万左右，使用寿命约一年）。

战哥的小肥兔

我真诚地期待每一位老师都能给予我宝贵的建议，您的参与对于我来说意义重大。

彩虹

有专门测培养基酸度计，电极和普通电极不太一样。

田园小草

什么方法一方法二，都是天方夜谭

灭菌前后都测有这么难嘛

监测标准以灭菌后为准

为什么要灭菌前测，是为了让灭菌后的pH落到标准范围内

通常情况下灭菌后会降低0.2，我记得没错的话

再说一遍没有方法一方法二，这个只有多灭几次，掌握经验

战哥的小肥兔

田园小草 发表于 2023-12-7 16:28
什么方法一方法二，都是天方夜谭

灭菌前后都测有这么难嘛

对于我这种新手来说，是没有什么经验的，pH值调节容易把控不好。监测标准以培养基灭菌后的pH值为准是毋庸置疑的，但是灭菌前检测可以给我们新手提供参考依据，弥补我们的经验不足吧。灭菌前后都测不是更能突显我们的控制过程吗

田园小草

战哥的小肥兔 发表于 2023-12-8 11:13
对于我这种新手来说，是没有什么经验的，pH值调节容易把控不好。监测标准以培养基灭菌后的pH值为准是毋庸 ...

小兄弟，我是说灭菌前后都测啊

战哥的小肥兔

田园小草 发表于 2023-12-8 13:03
小兄弟，我是说灭菌前后都测啊

不好意思可能是我理解错误，您说方法一和方法二是天方夜谭，想咨询一下，您那边琼脂类培养基灭菌前是怎么测的呢

wwwlhy1989

固体培养基一般使用专门的电极，试纸测定不准确，同一台pH计，搭配不同的电极头，就能解决你的困扰，灭菌前后都要测试pH的，一般是灭菌后下降0.2，不同厂家不同情况，自己评价