问一个关于检定菌传代的问题

南席

我厂情况：
一般用本地药检所购一支3代的菌种（是普通斜面培养基管，80元/支，药检所说是从中检所的冻干管活化传代而来），这支3代菌活化成了成若干支4代菌（一般是数支普通斜面培养基管，冰箱冷藏保存）来使用。
由于这种保存条件只有1个月贮存期，活化传种成5代，还再可以一次。
由于5代以后是不能用的，这样要频繁购买，即麻烦又费钱。

我的问题是：
1）买来的3代菌，活化传种成4代，是不是要用安瓿瓶抽真空熔封，在零下保存，用时取出一只进行传代，这样可以始终用第4代的菌种。这种方法必须吗，要购什么相关设备？
2）你们是如何做的？有什么简易方法？

咕咕

下面这个贴中花姐回答很位哈。这样你买一次可以用上几年没问题。
http://www.chinapat.com/forum.php?mod=viewthread&tid=3624

xiaxia-0919

一般细菌可以放3-6个月吧，一个月是不是太浪费了。好像复活就不能再一直冷冻保藏了。

南席

看了2楼贴子：除非一次传几十个小瓶用液体石蜡封存，每次用的时候就取一支复活用。

其它即使放3-6个月传代一次，仍然要频繁购新菌种。

这个几十个小瓶用液体石蜡封存技术，要用到特殊设备吗？

咕咕

液体石蜡封存,不要什么特殊设备.一般参加过微生物培训都会有这方面的内容.也有一个这个专业的网,一时忘记了叫什么了,里面有相关资料.

大呆子

向专家学习

南席

看来要加强学习学习

陈凤

液体封存后，考不考保存期限呢?

陈凤

液体封存后，考不考虑保存期限呢?   刚刚少打一个字

南席

这个技术一定要掌握，有实际的意义。

南席

有知道的请详细说说

南席

1．斜面低温保藏法

　　将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

　　保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。

　　此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。

　　2．液体石蜡保藏法

　　（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2，>121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。

　　（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。

　　（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准（图Ⅶ-12），使菌种与空气隔绝。

　　（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。

　　此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。

南席

以上是查到的资料，可以解决所有问题。

咕咕

楼主太给力了

南席

用其它方法，如冻干可以保存十年之久，要用到特殊设备，除非生产用菌种保藏。

如果只是检验用，不可能去购相关设备。
特此说明！

lingzhong

南席 发表于 2011-11-17 11:04
用其它方法，如冻干可以保存十年之久，要用到特殊设备，除非生产用菌种保藏。

如果只是检验用，不可能去 ...

即使是液体石蜡保存也是有有效期概念，因此，重复购买是不得不面对的问题，唯一的区别是购买时间间隔问题。

冻干保存绝无必要。

lingzhong

另外，貌似液体石蜡法也不适于药厂实验室的工作菌种。

qyhmj

也可以用沙土管保存，真空抽干

圣剑之心

用冻干管，然后-70保存，我们定的标准是3年

圣剑之心

需要设备有：无菌操作台，小冻干机，酒精喷灯，超低温冰箱（最好进口的）