关于高效液相的问题请教

ningwenquan

我手头有个产品，标准是2015版药典提高的，含量测定由原来的紫外改液相。
现在我们的问题是：我们完全按药典的方法，甚至使用药典推荐使用的色谱柱，可实验就时而能顺利完成，时而爱完全相同的条件下，根本不能出峰。一个阶段，一个阶段的。我们使用不同型号的仪器，调研过5种以上不同型号品牌的色谱柱，深入研究过流动相配制试剂、比例等等不同的因素，可没找到没原因。
哪位高人有相关方面的经验，给我们一个可行的思路？

汉字太少

个人看法是，出现这种现象的时候，将该样品用紫外测定一下，如果紫外检测结果表明样品没有问题，就排除了样品的问题。再多次进样，同一个样品多次进样，同时，对照品也要进样，样品和对照都没有峰，检查色谱条件，色谱条件没问题的话，就要考虑是不是仪器部分的问题了，仪器部分也要从简到难的检查，比如，二极管阵列检测器不需要调波长，是不是显示的时候不在波长处，或者坐标是不是太大，不能显示(有时候是小问题，但是没发现就变成了大问题)，这里没有问题的话，再考虑柱子的问题(一般柱子有问题的话，我个人认为，峰星不好，或者出峰时间不对，不出峰的情况应该很少，除非柱子已经坏到不能使用，但是即便是不分离，检测器也会有反应。)，柱子经过检查没有问题的话，那问题可能就大了。检测检测器。通常情况下，色谱柱不用调研好几种不同型号，色谱柱的制造技术相当成熟了，有差别也不会差到出现有峰没峰的程度。你下边补充的内容表明了一个趋势，柱效下降很快，会不会是样品中的杂质太多导致的呢。知道的有限，只能说这一点儿，说的不对的地方，还请见谅，学习一下，谢谢！

ningwenquan

实验现象说明：有时实验一开始，前面3、4针样品还可以，到后来，柱效看着往下掉，可能第8/9针左右峰就没有了。感觉是色谱柱被污染了，但用同样的方法去冲洗，也是时而有效，时而无效。

hongwei2000

氨基柱？

一路向西

使用的色谱柱匹配吗？

大草原制药人

是不是配制后的样品溶液应该在4度进样的问题？还是流动相与样品有降解的问题？

ningwenquan

谢谢各位。
就是C18柱。

ningwenquan

有时买一根新柱回来，检个3/4次没回提，再多就不行了。但奇怪的是有2点：一是检该项目不行，可检其他项目仍然没问题；二是，把柱子在其他项目上用一段时间，在掉头过来做该项目，又能做几次好的。

ningwenquan

有时买一根新柱回来，检个3/4次没问题，再多就不行了。但奇怪的是有2点：一是检该项目不行，可检其他项目仍然没问题；二是，把柱子在其他项目上用一段时间，在掉头过来做该项目，又能做几次好的。

ningwenquan

汉字太少 发表于 2016-8-1 12:25
个人看法是，出现这种现象的时候，将该样品用紫外测定一下，如果紫外检测结果表明样品没有问题，就排除了样 ...

样品确定是没问题的，有一个现象是：就在今天，我们把柱子冲洗了一个周末后，我们配置100ug/ml的样品，出峰了。峰高约400。可我们吧样品西施到10ug/ml，含量测定所需浓度，就又不出峰了。

zysx01234

ningwenquan 发表于 2016-8-1 13:10
有时买一根新柱回来，检个3/4次没回提，再多就不行了。但奇怪的是有2点：一是检该项目不行，可检其他项目仍 ...

色谱柱不要轻易掉头使用，防止固定相塌陷，柱子报废。

zysx01234

ningwenquan 发表于 2016-8-1 13:16
样品确定是没问题的，有一个现象是：就在今天，我们把柱子冲洗了一个周末后，我们配置100ug/ml的样品，出 ...

峰高400也不算高啊，可能这个样品+这种方法就是奇葩遇到奇葩，那你们自己摸索下，可能80-120ug/ml的浓度范围出峰会好点，把称样量，用多少ml的容量瓶都写出来而不算简单的取适量制成XX浓度——这样的操作是很有风险的
另外，仪器显示的量程是不是可以调的啊，感觉量程也没有调对。

汉字太少

ningwenquan 发表于 2016-8-1 13:16
样品确定是没问题的，有一个现象是：就在今天，我们把柱子冲洗了一个周末后，我们配置100ug/ml的样品，出 ...

10ug/ml的对照品溶液怎么样？出峰吗？

xiaxia-0919

排除设备和样品问题，应该是色谱柱上结合了难以清洁的成分，可能是样品中的杂质，但更有可能是待测成分本身，导致刚开始能分析，到后来不出峰，可以考虑每针结束后增加清洗的力度，包括换流动相、梯度洗脱等等。我曾经在检测一个保健食品中的吡啶甲酸铬含量时遇见过类似的问题。本来待测成分峰就小，如果再有其他影响，峰就看不见了。个人观点，仅供参考！

ningwenquan

汉字太少 发表于 2016-8-1 13:31
10ug/ml的对照品溶液怎么样？出峰吗？

10ug/ml不出。我们再次调整浓度至20，出了。

ningwenquan

汉字太少 发表于 2016-8-1 13:31
10ug/ml的对照品溶液怎么样？出峰吗？

含量检测就已经很痛苦了，更痛苦的是有关物质，自身对照的浓度更低……

ningwenquan

xiaxia-0919 发表于 2016-8-1 13:39
排除设备和样品问题，应该是色谱柱上结合了难以清洁的成分，可能是样品中的杂质，但更有可能是待测成分本身 ...

谢谢指点，考虑下摸索梯度洗脱。从现象来看，最大可能是色谱柱难以清洁。

ningwenquan

zysx01234 发表于 2016-8-1 13:30
峰高400也不算高啊，可能这个样品+这种方法就是奇葩遇到奇葩，那你们自己摸索下，可能80-120ug/ml的浓 ...

广东某市市所做的标准提高，写入15板药典，真的很奇葩。

ningwenquan

大草原制药人 发表于 2016-8-1 13:04
是不是配制后的样品溶液应该在4度进样的问题？还是流动相与样品有降解的问题？

标准中没有设置进样温度。

ningwenquan

该方法在网上也能找到很多相关的学术文章，都没有提到温度控制的。