气化过氧化氢灭菌程序及过程介绍

ielisa

对GMP车间洁净区定期进行灭菌是保证生产产品质量的一个重要环节。目前在我国对空间进行灭菌的常用方法是比较传统的甲醛熏蒸法。甲醛的杀菌能力不容置疑，但是随着科学技术的发展以及人们环保意识的增强，其越来越受到专家的质疑，因为甲醛是一种三致危害物。为了解决甲醛灭菌时间过长以及毒性和残留问题（会产生结晶状残留物），国内有不少企业开始采用气化过氧化氢灭菌技术。过氧化氢是一种广谱杀菌剂，气化过氧化氢灭菌技术由于灭菌时间短、无毒 、无残留，且灭菌效果容易验证，广泛被欧盟国家认可。我国的GMP认证要与欧盟接轨，洁净区采用过氧化氢灭菌技术必然为大势所趋。

目前气化过氧化氢灭菌已成为各国药典、药品生产质量管理规范(GMP)、消毒灭菌技术规范所推荐的方法，灭菌工艺已经非常成熟，重复性好，有专门的化学指示剂和生物指示剂验证过氧化氢气体分布均匀情况和无菌保证水平。可广泛应用于生物制药、医疗卫生、生物实验室和动物研究实验室等诸多领域。

[size=10.5000pt]一、试剂与仪器：

（1）生物指示剂（Biological Indicator，BI）：106CFU/片的嗜热脂肪芽孢杆菌，ATCC12980；

（2）化学指示剂（Chemical Indicator，CI）；

（3）浓度为30-35%的食品级过氧化氢溶液；

（4）胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）；

（5）PEA MLT-17 zeta气化过氧化氢发生器；

（6）PEA LiRo气体分布系统；

（7）灭菌车间：某疫苗生产单位GMP洁净车间，洁净区层高2.8m、面积100㎡，空间总体积约280m3。

二、灭菌过程：

整个灭菌过程分为以下几个阶段：

（1）放置灭菌设备：将PEA MLT-17 zeta发生器和LiRo气体分布系统推入洁净区前，先将设备表面用75％酒精擦拭清除干净，根据灭菌空间体积大小，向储液桶内添加足量的过氧化氢溶液；

（2）调节环境温湿度：通过洁净车间的空调系统对洁净区的温度和湿度进行调控，使二者达到设备可以灭菌运行的区间范围，一方面保证灭菌效果，另一方面降低腐蚀风险；

（3）布点：在洁净车间内布置足量的生物指示剂和化学指示剂，并做好标记；

（4）通过设备端或平板电脑设置灭菌程序：一个完整的灭菌循环主要包含以下4个部分：调试阶段（Waiting，Conditioning，Heating），主要是为人员撤离以及设备预热阶段；快速注入阶段（Vapourizing 1），在此阶段过氧化氢气体以一个较快的速率注入待灭菌空间，环境中过氧化氢气体浓度迅速升高；慢速注入阶段（Vapourizing 2），在此阶段过氧化氢气体以一个较慢速率注入待灭菌空间，维持过氧化氢气体浓度保持一定的时间；降解阶段（Neutralisation，Afterrun，End），在此阶段过氧化氢气体迅速分解产生水分和氧气，环境中过氧化氢气体浓度迅速下降。

程序设置

（5）启动循环：当温、湿度达到指定范围后，关闭空调系统，人员撤出灭菌洁净车间，启动灭菌循环，对车间进行门密封；

（6）结束：灭菌循环结束，开启空调通风系统通过洁净空气置换以排除房间内部残留的过氧化氢，从而使房间内空气中过氧化氢气体浓度低于职业允许暴露水平1ppm；

（7）收取化学指示剂和生物指示剂：观察统计化学指示剂的变色情况，无菌操作取出生物指示剂将其接种到TSB培养基中，所有培养基均需在培养箱中55℃～60℃的条件下进行培养，观察培养24h后和第7天的结果，同时做好阳性对照和空白对照；

（8）结果判定：经过24 h的培养，若培养液变浑浊，则判定为阳性；若培养液澄清，则为阴性；继续培养至第七天，如果培养液变浑浊，则判定为灭菌不合格 ；如果培养液澄清，则判定为灭菌合格。

三、灭菌结果：

气化过氧化氢灭菌技术，可对空气与物体表面进行生物除染，是一种非常有效的消毒灭菌方法。PEA的气化过氧化氢灭菌技术整个过程采用全自动化智能控制，可精确控制过氧化氢气体浓度，材料兼容性好，可减少对工作人员与环境的危害，其灭菌过程、工艺具有重现性，绿色、环保、安全可靠。

灭菌循环结束，所有的化学指示剂均变色明显，表明过氧化氢气体在空间内分布均匀；所有的生物指示剂无论是在培养的第24h或者培养结束的第7天，培养基均未变浑浊，表明灭菌合格。

气化过氧化氢灭菌技术是目前用于可密闭空间（如GMP车间、医院病房、生物安全实验室、实验动物中心、小型仓库等）和各种人造设备（如隔离器、冷冻干燥机、孵化箱、传递窗、生物安全柜、压力蒸汽灭菌器、过滤器和各类风管及管道等）的一种可靠的消毒灭菌方法，具有广阔的发展前景，是取代甲醛和臭氧等传统空间消毒灭菌的理想方法，也是今后空间消毒灭菌的发展趋势。

本人专注于VHP空间灭菌，大家有兴趣交流的，可以加我微信，论坛名字就是我的微信号。谢谢！

cloudsky

你们什么公司，有钱人啊。买PEA的设备。你这个不是气化，是汽化。两者有本质区别。我用过几种了，bioquell，steris，pea我一个哥们在他们公司，德国的。这玩意都是说什么干法，湿法。我学习了很多，还全英文版的资料。各种程序，验证也做的我头都大了。我想问一句，你们公司车间的彩钢板和仪器设备耐的住过氧化氢吗。你知道哪些涂层能耐吗？还有精密仪器设备是不能放在过氧化氢灭菌的房间里面用过氧化氢来灭菌的。很容易氧化。

ielisa

设定好灭菌程序，通过验证以后，以后车间的每次灭菌，只需要将设备放到固定位置，然后人员撤出，封门，平板电脑轻轻点击即可轻松完成灭菌，方便快捷，省时省力，安全高效！

syhorchid

谢谢分享

wflyxm

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cloudsky

原来是江凯兄，你在论坛里面。最近你在哪里啊。我也准备去广州做VHP验证了。

joysun

cloudsky 发表于 2020-6-2 17:20
你们什么公司，有钱人啊。买PEA的设备。你这个不是气化，是汽化。两者有本质区别。我用过几种了，bioquell ...

1.从腐蚀性角度来说，目前没有一种过氧化氢方式是气体，因此没有一种方式能保证对任何材质物料100%无腐蚀性;

2.企业选择过氧化氢灭菌方案判断的依据可以非常客观细化，因为每种过氧化氢的作用方式的原理是客观的，因此，了解了原理就可以轻松的判断，从而找到适合自身企业的灭菌方式

青春PK时间

麻烦加我下维信13402233819

cloudsky

joysun 发表于 2020-6-16 15:49
1.从腐蚀性角度来说，目前没有一种过氧化氢方式是气体，因此没有一种方式能保证对任何材质物料100%无腐蚀 ...

不明白你到底说的啥？过氧化氢有喷雾式，这是湿法工艺，有加热熏蒸式的，这是干法。两种方法有区别，对房间的灭菌效果也不同，指示剂判定也不一样。闪蒸方案这是PEA提出的，形成的就是过氧化氢气体。无腐蚀性？大哥，你到底对材料和过氧化氢是不是判定有错误。过氧化氢的灭菌原理就是强氧化性，对任何材料都会有腐蚀。不是看他有无腐蚀性，而是看你的材料是否耐得住，如果耐不住就不能采用这种灭菌方式。但是现在无菌制剂车间已经淘汰甲醛，臭氧又不能达到效果。以后过氧化氢灭菌是未来的趋势。

ielisa

cloudsky 发表于 2020-6-2 17:25
原来是江凯兄，你在论坛里面。最近你在哪里啊。我也准备去广州做VHP验证了。

你是？最近很少上论坛看了

AZER

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陈海玲

谢谢楼主分享，正要学习这些知识

gusuchengwai

挑战性很强的工作

hongbozg

谢谢楼主，好好学习一下！！

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