盘点影响Ames试验的三个因素

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沙门氏菌回复突变试验，Ames试验是目前国际公认的检测新药的致突变性、致癌性的首选试验，该试验利用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型突变株(His-)发生回复突的性质，对化学物质的致突变性进行初步筛选。研究发现组氨酸浓度、菌液浓度、S9浓度均会对Ames试验产生影响，因此在开展Ames试验时需要考虑这3个方面的因素。

1、S9浓度

Ames试验所用的沙门氏菌属于原核生物,缺少代谢活化系统,故Ames试验中需加入S9混合液作为代谢活化系统,该活化体系活性的强弱可能会对试验结果产生影响。许多致癌剂的生物转化是依赖细胞内微粒体混合功能氧化酶系来完成。大鼠肝S9是许多体外常用的体外活化系统，其主要有效成分为混合功能氧化酶系统，不加S9混合液得到阳性结果，说明受试物是直接诱变剂。加S9混合液得到阳性结果，说明受试物经过S9活化后产生致突变型。

遗传毒性检测不仅在药物研发的初筛阶段发挥重要作用，可以在很大程度上影响到药物开发的进程，而且可以降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。美迪西建立了符合国际标准的药物安全评价体系，实验研究遵循ICH、CFDA、FDA和OECD指导原则，可为客户提供高质量的数据、快速的研究周期的临床前药物安全性评价服务。张晓冬博士为美迪西临床前毒理学副总裁，系统、全面的负责美迪西专题负责人（SD）的管理工作，给予专业的技术指导。

有研究者通过Ames试验以评价蛋白质修饰粪肠球菌的潜在致突变性，受试物分为0.05、0.50、5.00、50.00mg/皿,另设对照组。以鼠伤寒沙门氏菌突变株TA97、TA98、TA100和TA102为试验菌株,在添加(+)或不加(-)S9的情况下进行Ames试验,计数回复突变菌落数[1]。结果表明,蛋白质修饰粪肠球菌在+S9、-S9的情况下,4株试验菌的平均回变菌落数均小于阴性对照组的2倍,且未见剂量-反应关系。蛋白质修饰粪肠球菌的Ames试验结果为阴性,表明该受试物无体外致突变性。

2、组氨酸浓度

组氨酸在Ames试验中扮演着一个重要的角色，首先在Ames试验中所用的培养基并非完全缺乏组氨酸，而是加入了微量的组氨酸，使营养缺陷型细菌能繁殖数代成为菌苔，同时使诱变物所产生的DNA损伤在复制过程中得到固定，从而又表现为功能基因细菌，只有这样的回变细菌才能进一步生长为菌落。另一方面，检测体系中的组氨酸及其前体物(如多肽、蛋白质等)达到一定量时可以支持His-缺陷型细胞生长和分裂，增加最终回复子菌落数，从而造成假阳性。在进行Ames试验时需要对组氨酸浓度进行探讨。

3、菌液浓度

菌液浓度会对Ames试验结果产生直接影响，由于Ames试验是对产生回复突变的菌落数进行计数,检测使用菌的量过低可能会导致受试物诱变能力表现不完全。为了提高Ames试验结果的稳定性及可比性,单因素试验结果表明组氨酸浓度、菌液浓度、S9浓度是需要控制的重要影响因素。正交试验表明3个影响因素之间可能存在交互关系,并不是在某个限量范围内任意组合就能得出较好结果,因此不能单一的就每个影响因素给出一个限量范围。

Ames试验广泛应用于致突变化学物的初筛，可对受试物的毒性进行分析，为该药用于临床提供了可靠的试验依据。

[1]蛋白质修饰粪肠球菌的Ames试验[J].