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日前，本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班，现将培训内容总结如下，希望对大家的实际工作有所帮助！
一、检测器常见故障排除
1、基线噪声
·检测池窗口污染：用强溶剂冲洗检测池；卸下检测池，拆开清洗或更换池窗石英片。
·样品池中有气泡：突然加大流量赶出气泡；在检测池出口端加一反压（0.2-0.3MPa）连一个0.3mm×1～2m的不锈钢管，以增大池内压（增加压力不要过大，防止检测池石英片碎裂）。
·检测器或数据采集系统接地不良：拆去原来的接地线，重新连接。
·检测器光源故障：检查氘灯或钨灯设定状态；检查灯使用时间、灯能量、开启次数；更换氘灯或钨灯。
·液体泄露：拧紧或更换连接件。
·很小的气泡通过检测池：流动相要仔细脱气；加大检测池的背压；系统检漏；有微粒通过检测池，清洗检测池；检查色谱柱出口筛板。
2、 基线漂移
· 检测池窗口污染：同基线噪声描述。
·色谱柱污染或固定相流失：更换色谱柱或使用保护柱。
·检测器温度变化：系统恒温。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·原先的流动相没有完全除去。
·溶剂储液瓶污染：清洗溶剂瓶，用新流动相平衡系统。
·强吸附组分从色谱柱中洗脱：在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱；使用溶剂梯度。
3、 工作站上出现大的尖峰
·检测池内有气泡通过：溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液。
·记录仪或检测器接地不良：消除噪声来源；确保良好接地。
·样品溶解不彻底。
4、 负峰
·检测器输出信号的极性相反。
·样品的吸收小于流动相，流动相不纯。
·样品溶剂干扰。
·示差折光检测器中样品的折射率较低。
·进样中带入气泡。
5、 鬼峰或假峰
·进样阀或注射器污染
·样品溶剂与流动相不同
·样品中有空气
·流动相中杂质引起
·在线过滤器或过滤沉子污染
·溶剂储液瓶污染
6、工作站不回零
⑴ 记录仪或工作站信号阶梯式上升
·检测器的输出范围设定不当：重新设定检测器的输出范围。
·记录仪或检测器接地不良：确保良好接地。
·吸收过大，平头峰
⑵ 记录仪、积分仪或色谱工作站在零点不平衡
·工作站故障。
·样品池中有空气：增大流量冲洗色谱系统除去气泡；在检测器出口处加一个背压；流动相脱气。
·从样品池出来的光能量严重减弱：检查光路，清除堵塞物；清洗检测池或更换池窗。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·检测器与色谱工作站之间的电路接触不良。
·色谱柱固定相流失严重：更换色谱柱。
·原先的流动相污染：彻底冲洗系统流动相
·吸收太强：改变检测波长。
7、随泵运动出现噪声
⑴ 基线随着泵的往复出现噪音：仪器处于强空气中或流动相脉动改变
仪器放置位置：放在合适的环境中。
·用一调节阀或阻尼器以减少泵的脉动。
⑵ 随着泵的往复出现尖刺
·检测池中有气泡。
·卸下检测池的入口管与色谱柱的接头，用注射器将甲醇从出口管端推进，以除去气泡。
二、色谱柱系统故障排除
1、色谱柱在使用过程中易出现的问题及解决的方法
⑴ 谱峰分叉：首先应判断柱头是否有柱头塌陷?
·柱头塌陷：流动相含盐时，冲洗系统要用20%的甲醇／水，不要用纯水冲柱，修补色谱柱。
·柱外死体积：检查进样阀→色谱柱→检测器的管路连接有无死体积，更换密封环(刃环)。
·柱头填料污染：严格过滤流动相和样品，修补色谱柱。
·进样阀密封问题：检修进样阀。
·样品分解
·色谱柱填充不实：重新填充固定相。
· 色谱柱受到强烈振动：修复或更换。
⑵ 柱压过高：不要认为压力高就是色谱柱的问题，首先判断是否是色谱系统管路阻塞
判断方法：分段检查泵→在线过滤器→进样阀→色谱柱→检测器→排液管。
· 在线过滤器阻塞：溶剂过滤不好或密封圈磨损，用30%硝酸超声在线过滤器，再用水超声。
·进样阀定量管阻塞：样品过滤不好，更换定量管。
·管路阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，高压反冲，加热或更换管路。
·保护柱阻塞：缓冲液中的盐遇到甲醇结晶，系统用20%甲醇/水彻底置换后,接上色谱柱小流量反冲。
·压力传感器不准确。
·泵流量偏大。
·色谱柱的问题：主要有微粒堵塞；流动相改变造成粘度变化；柱床膨胀；样品在色谱柱上不可逆吸附；
细菌滋生。联系色谱柱生产厂家寻求帮助。
⑶ 重复性差
·色谱柱被污染。
·流动相pH值及组成不合适造成键合相流失，如通常的硅胶基质色谱柱在碱性条件下使用。
·样品溶剂不同或样品本身不稳定。
·进样技术问题。
⑷ 柱效降低
·色谱柱被污染
·官能团坍塌
·色谱柱内的死体积
① 流动相pH值及组成不合适造成固定相流失。
② 流速急剧变化造成固定相物理损坏。
③ 机械震动造成固定相产生裂缝。
④ 柱床收缩或干涸。
⑸ 选择性变化
·应用色谱柱是否正确?
·固定相表面是否有未洗脱样品?
·流动相pH、组成、温度等
·键合功能团流失?
·在评价条件下重新检测
⑹ 柱外效应
·用小于3mm内径的色谱柱。
·进样阀和色谱柱、色谱柱和检测器之间用短的细内径的连接管。
·用无死体积接头。
·用较小体积的检测池。
·进样体积减小。
⑺ 色谱峰分裂
·柱外死体积。
·柱头填料污染。
·部分阻塞。
·进样阀密封问题。
·化合物一起洗脱。
⑻ 色谱峰展宽
① 所有的色谱峰展宽
·柱效降低。
·进样体积太大。
② 部分色谱峰展宽
·上次进样洗脱的色谱峰。
·蛋白或聚合物等高分子量化合物。
⑼ 色谱峰拖尾
① 所有色谱峰拖尾
·柱外效应。
·柱头污染。
·重金属离子。
·色谱柱填充不理想。
② 部分色谱峰拖尾
·次级保留效应–残留硅醇基的作用。
·在大峰的尾部有小峰。
⑽ 峰前伸
·色谱柱没有充分平衡。
·在主峰前有小色谱峰。
·流动相的溶剂强度低于溶解样品的溶剂。
2、色谱柱的保存： ·短期不用必须冲洗干净后保存.。
·长期不用每隔2~3个月冲洗一次。
·防止强烈振动。
·防止细菌生长。
·注意存放温度。
3、色谱柱的寿命
·色谱柱筛板问题。
·强保留的样品组分影响。
·色谱柱填充不良。
·压力影响。
·化学影响。
来自辽宁省药检所。
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发表于 2013-12-6 09:21:24
谢谢么么茶分享！