求助

hanixdg · 发表于 2014-5-30 12:45:30

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亲和层析后的抗体经过不同的pH处理后，调至中性，然后用PBS稀释成1mg/ml，上样跑非还原电泳，竟然这么多杂带，但是SEC检测的结果是97~98%的纯度，这么矛盾的数据，难道SDS哪里出问题了？附上SDS图

仲夏秋夜云 · 发表于 2014-5-30 13:33:34

SEC很粗糙的，很多情况下分不开的
另外看看处理过程中，是不是蛋白降解，你这一长溜的，很难说的。

仲夏秋夜云 · 发表于 2014-5-30 14:33:56

样品处理的时候，加热过头了

hanixdg · 发表于 2014-5-30 16:15:03

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 14:33
样品处理的时候，加热过头了

没有加热，直接用的非还原缓冲液跟样品混合，直接上样的。奇怪的是，这个工艺出来的亲和样品一般纯度都可以达到95以上的。怎么SDS出来就那么一连串的降解物似的。

仲夏秋夜云 · 发表于 2014-5-30 16:36:20

hanixdg 发表于 2014-5-30 16:15
没有加热，直接用的非还原缓冲液跟样品混合，直接上样的。奇怪的是，这个工艺出来的亲和样品一般纯度都可 ...

你确定SEC方法没问题？

hanixdg · 发表于 2014-5-30 16:49:51

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 16:36
你确定SEC方法没问题？

怎么说呢？因为这个方法是质检那边做的，他们说已经经过了验证。还有其他样品SEC测出来99%，电泳结果也是相对符合的，就是右边的那几个样品。所以我就困惑了。

hanixdg · 发表于 2014-5-30 16:51:11

hanixdg 发表于 2014-5-30 16:49
怎么说呢？因为这个方法是质检那边做的，他们说已经经过了验证。还有其他样品SEC测出来99%，电泳结果也是 ...

不好意思，没有上图。也就是说用这个SEC测的一个样品纯度99%，然后跑的SDS电泳基本也是一条很纯的带。

仲夏秋夜云 · 发表于 2014-5-30 16:58:12

hanixdg 发表于 2014-5-30 16:51
不好意思，没有上图。也就是说用这个SEC测的一个样品纯度99%，然后跑的SDS电泳基本也是一条很纯的带。

要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了

yuansoul · 发表于 2014-5-30 18:52:49

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 16:58
要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了

你原来是超版吧？

yuansoul · 发表于 2014-5-30 18:56:57

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 16:58
要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了

我会继续95%的支持你

仲夏秋夜云 · 发表于 2014-5-30 19:46:50

yuansoul 发表于 2014-5-30 18:52
你原来是超版吧？

我原来是实习版主

yuansoul · 发表于 2014-5-30 20:18:22

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 19:46
我原来是实习版主

不科学

hanixdg · 发表于 2014-6-5 14:49:57

仲夏秋夜云发表于 2014-5-30 16:58
要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了

很纠结，不知道应该相信哪个结果

hanixdg · 发表于 2014-6-5 14:50:36

hanixdg 发表于 2014-5-30 16:51
不好意思，没有上图。也就是说用这个SEC测的一个样品纯度99%，然后跑的SDS电泳基本也是一条很纯的带。

是的~所以我认为SDS电泳应该是可信的

yuansoul · 发表于 2014-6-5 15:01:48

“ @hanixdg 为什么不是100%支持呢？++ 发表于 11 分钟前” 因为酱紫说太虚伪了，就像有人说：“爱你一生一世。。。。。。”你直接就可以把他踹到海里淹死

hdc2001 · 发表于 2014-6-5 15:36:37

1.检测方法是否经过验证？
2.SDS-PAGE样品处理过程不恰当。

hanixdg · 发表于 2014-6-5 16:50:30

yuansoul 发表于 2014-6-5 15:01
“ @hanixdg 为什么不是100%支持呢？++ 发表于 11 分钟前” 因为酱紫说太虚伪了，就像有人说：“爱你一生 ...

说的是~太虚伪了