关于药典中分子量的要求

不是高手

中国药典三部   注射用重组人白介素-11中： 3.1.5 分子量    依法测定（通则0541第五法）。取供试品溶液（不进行水浴加热处理），用还原型SD&聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的表观分子量应与对照品的一致，经对照品分子量校正，制品的分子质量应为19.0kD±l.9kD。
个人理解：1.制品的表观分子量应与对照品的一致 应该是个定性要求，但是却描述成分子量和对照品一致，是否就是计算出来的数值一样，对于SDS-PAGE方法本身来说有难度，因为其影响因素很多，才会有±10%的范围；
   2. 经对照品分子量校正，制品的分子质量应为19.0kD±l.9kD。应该是个定量的要求，但是如果第一条满足了，这条肯定满足啊。


   因个人水平有限，可能理解的不对，还恳请各位大神解惑，谢谢！

不是高手

SDS-PAGE 做到表观分子量和标准品一致应该是有难度的吧。

cnosema

对照品是普通的分子量对照，还是标准品对照？

cnosema

分子量一致，是定性要求。跑过胶吧？

cnosema

不是高手 发表于 2017-7-18 11:28
SDS-PAGE 做到表观分子量和标准品一致应该是有难度的吧。

如果是标准品，反而难度不大。

另，跑胶嘛，多跑几次总能跑出合适的结果，前提是产品为合格产品。

不是高手

cnosema 发表于 2017-7-18 19:57
如果是标准品，反而难度不大。

另，跑胶嘛，多跑几次总能跑出合适的结果，前提是产品为合格产品。

首先，感谢您的回答，但是还没解决我的疑惑，作为QC是不能多跑几次的。

不是高手

cnosema 发表于 2017-7-18 19:54
分子量一致，是定性要求。跑过胶吧？

如果说是条带位置一致，可以理解为定性，如果是分子量一致，应该就是指数值了吧，数值的一致，应该就是计算出来一样，我的疑惑也就是在这里，如果药典规定像其余生物制品，比如
重组人粒细胞刺激因子注射液
3.1.5 分子量
    依法测定（通则0541第五法）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为18.8kD±1.9kD。
就很好理解了。

cnosema

不是高手 发表于 2017-7-19 12:10
首先，感谢您的回答，但是还没解决我的疑惑，作为QC是不能多跑几次的。

跑胶的电泳仪，带有审计追踪吗？如果是你自己严格要求，是另一回事。

那你对于这个电泳技术的培训，可以做到了每次跑胶都能够一次过的程度了？万一胶没做好呢（假设不是用买来的现成胶）？万一上样有点跑样呢？跑胶时候电压有点不稳呢？万一跑的样有点拖尾呢？出了微笑脸咋办？

想一次过，技术要求不是一般的高哈。

cnosema

不是高手 发表于 2017-7-19 12:42
如果说是条带位置一致，可以理解为定性，如果是分子量一致，应该就是指数值了吧，数值的一致，应该就是计 ...

所以要问，对照品是什么？是普通分子量对照，还是标准品？

如果是普通分子量对照，有没有那个19KD的带都不一定呢。要是那个附近只有17Kd和21KD的带呢？所谓一致，就是在这2条带之间了呗。

如果是标准品，那没有话说，跑出来的位置至少需要看起来一样吧。

不是高手

cnosema 发表于 2017-7-19 20:31
所以要问，对照品是什么？是普通分子量对照，还是标准品？

如果是普通分子量对照，有没有那个19KD的带都 ...

工作标准品

cnosema

不是高手 发表于 2017-7-20 11:51
工作标准品

所以是一样的东西哈，那没话说了，跑胶吧。跑出一样的位置，或者稍高稍低的，就算过关。

另外想起一个，如果跑胶的结果进行定量的话，就要对胶上相关那个蛋白条带进行定量。或者扫胶然后定量，或者转到膜上，杂交之后再扫描，进行定量。这样看，如果只是对分子量的大小进行要求，而没有对蛋白的含量进行要求，只能是定性了哈。

不是高手

cnosema 发表于 2017-7-20 12:02
所以是一样的东西哈，那没话说了，跑胶吧。跑出一样的位置，或者稍高稍低的，就算过关。

另外想起一个， ...

谢谢指导，只是一直纠结于数值的一致怎么判断，因为像你提到的位置一致，倒是好判断。

不是高手

不是高手 发表于 2017-7-20 12:18
谢谢指导，只是一直纠结于数值的一致怎么判断，因为像你提到的位置一致，倒是好判断。

真的很感谢！