抗体降解

六月守望 · 发表于 2018-1-17 16:35:46

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CHO细胞表达，下罐前各项质量指标均比较好，下罐后经深层过滤后上亲和柱,洗脱下来送检，出现较多片段。填料为GE Mabselect SuRe LX,
平衡液：10mMPB，淋洗液为10mMPB+0.5MNaCl，洗脱液为20mM 柠檬酸—柠檬酸钠PH3.7
第1cycle，收集液比较澄清，送检也出现部分降解
第2cycle收集液呈现粉红色，送检大部分降解
引起抗体降解原因，请各位老师不吝赐教，谢谢。

剑魔 · 发表于 2018-1-18 07:04:29

会不会是温度影响

hongwei2000 · 发表于 2018-1-18 09:02:20

抗体本身还是比较稳定的
不一定是降解吧
有可能的原因包括
亲各柱特异性较差吸附了杂蛋白
第一次洗脱不彻底造成了杂蛋白残留
抗机有多个三/四级结构被你认为是有杂质存在

gxxq123 · 发表于 2018-1-18 11:17:44

楼主做的是FC-融合蛋白吧，蛋白等电点是偏酸性还是碱性，用的Buffer是PB中性的？

每驿必通 · 发表于 2018-1-18 21:16:48

洗脱条件是否合适？

六月守望 · 发表于 2018-1-19 16:22:30

gxxq123 发表于 2018-1-18 11:17
楼主做的是FC-融合蛋白吧，蛋白等电点是偏酸性还是碱性，用的Buffer是PB中性的？

我做的是人源化抗体，等电点偏碱性，PB是中性

六月守望 · 发表于 2018-1-19 16:24:50

infatuationty 发表于 2018-1-18 07:04
会不会是温度影响

我上批成功，质量没问题。实验显示跟温度没有关联。

六月守望 · 发表于 2018-1-19 16:31:19

hongwei2000 发表于 2018-1-18 09:02
抗体本身还是比较稳定的
不一定是降解吧
有可能的原因包括

CE 结果显示抗体降解且随持续降解；图谱显示洗脱应该没问题，碱洗都没峰。

六月守望 · 发表于 2018-1-19 16:34:33

每驿必通发表于 2018-1-18 21:16
洗脱条件是否合适？

洗脱条件没问题，小规模中试我们做个验证，工艺开发阶段也做个稳定性研究

[研发注册] 抗体降解

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