细菌内毒素检测（凝胶法）

素雅123

按欧洲药典2.6.14细菌内毒素检查法和USP细菌内毒素检查法进行检测

        试液与试药

细菌内毒素工作标准品，

鲎试剂（λ）0.06EU/ml，

细菌内毒素检查用水

        仪器与用具

无热源取样瓶，无热源玻璃试管，试管架，电子分析天平，超声仪

        试管恒温仪、漩涡混合仪、净化工作台、数显鼓风干燥箱干燥箱（设置温度能≥250℃），

        pH计，冰箱，冷藏柜，封口膜，水浴锅，10ml小试管，无热源移液管。

        试剂的制备：根据样品的检测要求把细菌内毒素标准品稀释成2.0λ的细菌内毒素标准溶液。

        测试程序：在无菌的条件下进行操作，每一批样品都包括以下测试程序。

        阳性水控制

        阴性水控制

        样品控制

        样品阳性控制

        制备10mg/ml的马波沙星样品溶液

准确称取100mg样品于去热源锥形瓶中，并加10ml内毒素检测用水进行溶解。得到10mg/ml的马波沙星样品溶液。将上述溶液置于超声仪上超声15min，然后将溶液置于45～50℃水浴中水浴20～45min直至样品溶解。

        供试品的最大有效稀释倍数

MVD=(内毒素限度×样品浓度)/λ

MVD=(内毒素限度×样品浓度)/λ=(0.3EU/mg 马波沙星×10mg马波沙星/ml)/(0.0625EU/ml)=48倍

即供试品需做48稀释后进行检查，若检测结果为阳性，表明该供试品的内毒素含量≥0.3EU/g，已超过限值，若检测结果为阴性，表明该供试品的内毒素含量＜0.3EU/g

        测试溶液配制：

1:2：于无菌条件下移取1.0ml样品溶液（浓度为10mg/ml马波沙星）于去热源试管中，并加1.0ml内毒素检测用水（LRW）

1:4：于无菌条件下移取1.0ml 1:2测试溶液于去热源试管中，并加1.0ml内毒素检测用水（LRW）

1:8：于无菌条件下移取1.0ml 1:4测试溶液于去热源试管中，并加1.0ml内毒素检测用水（LRW）

每份稀释液需要在漩涡混合器上至少混合1min。

1:24：于无菌条件下移取1.0ml 1:4测试溶液于去热源试管中，并加2.0ml内毒素检测用水（LRW）

每份稀释液需要在漩涡混合器上至少混合1min。

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