微生物方法开发:铜绿和枯草无法形成单个菌落问题

倾悠扬

有些片剂微生物方法开发的时候用薄膜过滤法时，由于滤膜上有样品残留导致铜绿和枯草无法形成单个菌落，导致不能进行计数。即使对供试液进行稀释（如制成1:100  1:200的供试液）也不行，滤膜上还是有样品残留。有些产品抑菌性很强，用1:100  1:200的供试液1ml 平皿法回收率也不合格。

有没有什么方法能使铜绿和枯草在滤膜上不扩散？

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joshua

扩散一般是 膜表面水分太多所致，菌液主不扩散吗？ 尽量膜抽干一些（当然有些牌子过滤系统就是抽不那么干）

回收率不行 就增加缓冲液冲洗次数，加菌 操作放在最后一次冲洗缓冲液的时候

倾悠扬

joshua 发表于 2020-05-30 15:56
扩散一般是 膜表面水分太多所致，菌液主不扩散吗？ 尽量膜抽干一些（当然有些牌子过滤系统就是抽不那么干）

回收率不行 就增加缓冲液冲洗次数，加菌 操作放在最后一次冲洗缓冲液的时候

用的默克的三联支架，平皿使用放了好几天的TSA 板，只要有样品铜绿和枯草就成不了形。

有些样品冲洗量是5*100ml ，还是不长，用的是最后一次冲洗时加菌。

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joshua

倾悠扬 发表于 2020-5-30 16:23
用的默克的三联支架，平皿使用放了好几天的TSA 板，只要有样品铜绿和枯草就成不了形。

有些样品冲洗量是 ...

再试试 贴膜后 打开盖子放工作台晾干10分钟，菌落连片一般都是水分太多导致的

抑制性 只能再试试中和剂+最高稀释级别过滤；如果还是不行，就按药典说的豁免部分菌的回收率要求

咒逐

有做阳性对照么？阳性菌液对照没问题那薄膜过滤法这套回收系统就没问题的，如果阳性也有问题才考虑去解决回收方法，

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咒逐

如果回收系统没问题，可以考虑中和剂法。中和剂无效，可以试试做培养基稀释。不行再找其它资料。楼上朋友说的豁免我没见过，说法有出处么？

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joshua

咒逐 发表于 2020-5-30 18:35
如果回收系统没问题，可以考虑中和剂法。中和剂无效，可以试试做培养基稀释。不行再找其它资料。楼上朋友说 ...

就是药典微生物计数法 原文说的啊

而且结合现实也是这个道理吧，比如你家产品本身就是 高效抗生素，那极有可能随便你怎么试验回收率就是做不合格啊

咒逐

joshua 发表于 2020-5-30 21:53
就是药典微生物计数法 原文说的啊

而且结合现实也是这个道理吧，比如你家产品本身就是 高效抗生素，那 ...

1105里面P144页（我是PDF版）“5.结果判断”的原文第二段是“方法适用性确认时，若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求，那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检査。”
这个意思应该是说最起码要能做一个确切的回收率出来，才有选择的余地。按照题主的问题，是无法进行计数的。所以关于“豁免”一词，如果我理解没错，是不做？据此，有此疑问。
相关内容我也查询了一下9201，也没有发现说可以不做的。

joshua

咒逐 发表于 2020-6-2 16:46
1105里面P144页（我是PDF版）“5.结果判断”的原文第二段是“方法适用性确认时，若采用上述方法还存在一 ...

“豁免”我的意思是 你该采取的措施都尝试过了，中和剂、过滤法全都试了一遍，就是达不到药典回收率的要求，那就祭出 风险评估大法，说对那几个做不出来的菌 直接“豁免”了回收率的要求，选一个最合适的方法

像我这样的人1

有些样品对这两种菌的生长形态确实干扰挺大的，鉴于你说的稀释级和冲洗次数以及也注意了水分的问题。我觉得你还可以把菌数控制的再低一点，观察时间再早点这两方面试一试。

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梅子12345678910

有样品残留是肉眼可见的吗？那应该考虑增加一些中和剂让样品充分溶解，也可以增加冲洗次数，原先100ml每次的改成50ml每次，同时也可以增加冲洗量。最后，贴膜时保证膜的干燥。

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逝水无痕兔兔

主要还是样品在膜上有残留导致菌蔓延生长，可以取上清液或者加大稀释倍数

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