体外诊断防腐剂：牛莎PC-300抑菌剂（苏州晶茂）

Xiely

常用防腐剂的特性

1、叠氮钠（sodium azide，NaN3）

叠氮钠是体外诊断试剂中最常用的防腐剂之一，可抑制细胞生长，溶于水、液氨，不溶于乙醚，微溶于乙醇，用量一般为0.1%~0.5%。多数情况下行之有效，但由于其含有氨基，会干扰辣根过氧化物酶（HRP）、超氧化物歧化酶、触酶等多种酶，所以一般含有HRP的试剂都不建议使用。同理，一般不用于抗体及酶免实验中的标本保存。另外，它能阻断细胞的电子传递链，对许多生物体都有毒性，因此也不适用于活体实验。同时，叠氮钠与氰化*相似，属于剧毒化合物，半数致死量为27 mg/kg（大鼠，经口），对细胞色素氧化酶和其他酶有抑制作用，并能使体内氧合血红蛋白形成受阻，有显著的降压作用。急性中毒出现头晕、头痛、全身无力、血压下降、心动过缓和昏迷。除对眼和皮肤有刺激性外，还可经吸入、口服或皮肤吸收引起中毒死亡，而且遇高热或剧烈震动能强烈爆炸，使用时应十分注意安全[3]。出于安方面的考虑，叠氮钠的使用日益受限。

2、硫柳汞（thiomersalatum，C9H9O2HgNaS）

硫柳汞作为防腐剂已有60多年历史，曾广泛用于生物制品中的疫苗及体外诊断试剂。硫柳汞稍有特殊臭味，微有引湿性，遇光易变质，易溶于水、乙醇，不溶于乙醚和苯，用量为0.001%~0.01%。它对革兰阳性和阴性菌均有很强的抑菌能力，为广谱抑菌剂。其作用机理为重金属离子与菌体中酶蛋白的巯基结合而使酶失去活性，但对细菌抗原和血清蛋白的损害极其微弱，不能与酸、碘、铝等重金属盐或生物碱配伍。硫柳汞为含汞化学物质，汞含量占到分子质量的50%，代谢或降解产物为乙基汞和硫代水杨酸盐，乙基汞是由二甲基汞降解的有机汞。由于少量有机汞在理论上具有神经毒性[4]，因此硫柳汞的使用安全问题深受人们关注。

3 、庆大霉素（gentamicin，C21H43N5O7）

庆大霉素是由绛红小单孢菌、棘孢小单孢菌等发酵产生的氨基糖苷类抗生素，是由22-脱氧链霉胺、绛红糖胺、加拉糖胺组成的多组分混合物，并以C 族复合物为主。其作用机理是直接与30S核糖体亚单位16S rRNA解码区的A部位结合，从而导致菌体死亡。它的抗菌谱较广，对绿脓杆菌、大肠杆菌、产气杆菌、克雷伯杆菌、奇异变形杆菌、某些吲哚变形杆菌、某些奈瑟菌、某些无色素雷杆菌和志贺菌等革兰阴性菌有抗菌作用，对革兰阳性菌中的金黄色葡萄球菌也有很强的抗菌作用[5]。但抗生素的缺点是容易产生耐药性，Jakobsen 等[6]曾报道了120 株对庆大霉素耐药的大肠埃希菌的最小抑菌浓度（MIC）和耐药机制的关系。

4、 异噻唑啉酮类（isothiazolinones）

异噻唑啉酮类防腐剂，是2种异噻唑啉酮类化合物的混合物，并含有一定量的硝酸镁及氯化镁。此类防腐剂是非常高效的防腐剂，对各种细菌、霉菌、酵母及藻类有很强的抑制作用，使用浓度为0.1%~0.02%（活性成分约为1.5%）。其作用机理为2 种活性成分在与细胞膜接触几分钟后，可立即渗透到膜内并抑制细胞内酶的活性，从而抑制细胞生长代谢、大分子合成，引起细胞内能量水平迅速下降；由于能量体系的崩溃，细胞不能合成日常代谢所需要的化合物，从而导致菌体死亡[7]。这类防腐剂能与氯及大多数阴、阳离子及非离子表面活性剂混溶，且在较高的使用浓度下不会影响酶活性。pH 适用范围广（pH2~8.5），化学稳定性好。经实验室检测，在25℃下保存2年，该防腐剂的活性组分仅损失3%，与水可以任意比混合。此系列防腐剂具有多标靶作用位点，因此大大降低了因变异产生的微生物的耐药性，是一种理想的可替代硫柳汞、叠氮化钠和庆大霉素的生物防腐剂。但遇铵、亚硫酸盐、强还原剂和强碱性会降低其活性，在过量使用下有一定的刺激性和致敏性。

Xiely

经过一段时间的整理和归纳，总结在体外诊断试剂中使用PC-300的一些注意事项：

Proclin300是在体外诊断试剂中使用非常广泛的一种抑菌剂，主要活性成分是两种异噻唑啉酮的混合物，包含甲基氯异噻唑啉酮（5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one, CMIT）和甲基异噻唑啉酮（2-Methyl-4-isothiazolin-3-one, MIT），含量比例为3:1，这种混合物的含量在3.0-3.6%。广泛应用于生化试剂、免疫试剂、凝血试剂、分子生物试剂、电泳液、PCR/DNA检测相关的缓冲剂、血细胞分析试剂、各种稀释液、缓冲液、清洗液等。

PC300抑菌原理：两种主要活性成分抑制细胞的生长以及促使细胞凋亡的原理相同。活性成分在与细胞膜接触几分钟后，立即可以渗透到膜内并抑制细胞内酶的活性。目标酶处于细胞代谢KREBS 循环的中心位置， PC-300 抑菌剂作用KREBS 循环的四个不同位置（见左图）：丙酮酸脱氢酶（ pyruvate dehydrogenase），a -酮戊二酸脱氢酶（ ketoglutarate dehydrogenase），琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase）和NADH 脱氢酶（NADH dehydrogenase）。从而抑制细胞生长代谢，大分子的合成，引起细胞内能量水平迅速下降。由于能量体系的崩溃，细胞不能合成日常代谢所需要的化合物。所有的细菌及真菌至少拥有部分KREBS 循环，所以牛莎PC-300 抑菌剂的适用范围非常广泛。

使用牛莎PC-300抑菌剂（等同于西格玛Proclin300）使用时的注意事项：
1、PC300抑菌剂本身就是双抑菌系统，在抑菌能力上会更优，同时具有快杀功能，适用范围广，所以也是优选选择使用的抑菌剂。
2、试剂PH＞8.5时，不适合使用PC300，建议使用牛莎PC-950、牛莎BIT-10抑菌剂。
3、在浓缩缓冲液中，不适合使用高浓度的PC300，容易出现发黄，甚至会出现沉淀析出。在浓缩配方中，建议使用少量PC300，比如0.05%PC300，再以牛莎Pc-950、牛莎BND-10、牛莎BIT-10、牛莎GML-2等抑菌剂为主，后面这些防腐剂不会出现发黄的现象。
4、部分项目会出现单独使用PC300抑菌效果不理想的现象，这时单独提升PC300浓度，还不如添加第二种抑菌剂（比如BND-10）组合使用，多抑菌系统抑菌效果会更好，同时可以避免发黄现象发生。
5、PC300抑菌剂是一个不含水和金属离子的配方，在使用的时候注意核对COA文件，各指标含量是否明确，特别主要镁离子、铜离子等金属离子的含量是否超标（生化分析仪的检测可以是一个简易的方案）

Xiely

异噻唑啉酮类防腐抑菌剂，现在使用越来越广泛

syhorchid

谢谢分享

野风吹北

叠氮钠剧毒

yh9f8ade21

是啊，防腐剂很难选

hot2008win

硫柳汞  看到一些文章说对PCR有促进作用

Xiely

叠氮钠买起来也很麻烦。大家可以一起探讨下，现在都用了什么防腐剂

Xiely

野风吹北 发表于 2020-6-11 08:17
叠氮钠剧毒

你们现在还在使用部分叠氮钠吧？

Xiely

hot2008win 发表于 2020-6-12 18:11
硫柳汞  看到一些文章说对PCR有促进作用

叫什么文章啊？这个防腐剂里面的贡很麻烦

Xiely

yh9f8ade21 发表于 2020-6-11 08:58
是啊，防腐剂很难选

你一般用什么防腐剂，不同项目选用不同的，有的组合使用？

xy952019898

很有用，像赛默飞，sigma这种大公司适用的防腐剂多吗

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Cresar

Xiely 发表于 2021-11-17 11:13
经过一段时间的整理和归纳，总结在体外诊断试剂中使用PC-300的一些注意事项：

Proclin300是在体外诊断试 ...

请教一下，PC-950和PC-300有什么区别？950能替换300使用吗？

Xiely

Cresar 发表于 2021-11-17 16:12
请教一下，PC-950和PC-300有什么区别？950能替换300使用吗？

1、PC-950主要活性成分是MIT，PC-300主要活性成分是CMIT和MIT的混合物（相当于双抑菌系统），理论上抑菌效果更好，这也是大家优先选择PC-300的原因。2、PC-950适用的PH更广，比如＞8.5，PC-300就不是很适合；3、PC-300是有机配方，PC-950是水做溶剂。4、建议替代PC-300，更多的在两个时候：PH＞8.5；或者浓缩配方里面（PC-300溶液发黄）；5、替代的时候建议使用双抑菌系统：比如牛莎PC-950+牛莎BIT-10或牛莎PC-950+牛莎BND-10

Xiely

xy952019898 发表于 2021-11-17 12:35
很有用，像赛默飞，sigma这种大公司适用的防腐剂多吗

sigma有自己的防腐剂，比如ProClin300，但价格货期等受影响，国产的牛莎PC-300完全可以替代；赛默飞看他的产品线，肯定是有可以用的的

13wuo2mlui

想问下高浓度proclin 300容易发黄的根本原因是啥呀

Xiely

13wuo2mlui 发表于 2023-12-18 11:06
想问下高浓度proclin 300容易发黄的根本原因是啥呀

可以联系苏州晶茂生物技术有限公司询问，18136060323