SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量分析方法验证

峰行 · 发表于 2021-7-5 09:03:37

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各位大咖，请问我们的产品要做分子量（SDS-PAGE法），现在要求做分析方法验证，我把分子量归类为鉴别项，按照分析方法验证指导原则，只需要做专属性和耐用性即可，但是现在讨论后认为不属于任何一类，可能需要将能做的项目全做，请问这个验证怎么做准确度、检测限、定量限、线性、范围？

山顶洞人 · 发表于 2021-7-5 09:20:46

那就是分类错了，你先描述一下方法，我觉得很神奇，起码，定量、检测这些指标，是对着含量项目来的。另外，很神奇的是，你产品的分子量是稳定的？
鬼知道你家谁参与了讨论。

零点昌昌 · 发表于 2021-7-5 11:32:03

这是2020版药典通则0541 电泳法第五法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）。是药典方法，所以你们按药典要求做方法学确认即可。

峰行 · 发表于 2021-7-5 12:03:03

山顶洞人发表于 2021-7-5 09:20
那就是分类错了，你先描述一下方法，我觉得很神奇，起码，定量、检测这些指标，是对着含量项目来的。另外， ...

方法就是同时上样marker和样品，marker的若干条带的迁移距离和分子量做线性回归，然后将样品的迁移距离算出分子量。分子量是稳定的。

山顶洞人 · 发表于 2021-7-5 13:26:51

峰行发表于 2021-7-5 12:03
方法就是同时上样marker和样品，marker的若干条带的迁移距离和分子量做线性回归，然后将样品的迁移距离算 ...

挺好奇的，回头研究看看。正在学习这部分的东西

峰行 · 发表于 2021-7-5 14:15:41

零点昌昌发表于 2021-7-5 11:32
这是2020版药典通则0541 电泳法第五法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）。是药典方法，所以你们按 ...

但是我们的产品并没有被药典收载，讨论结果就是属于方法验证，需要做全面的验证，而不是确认。

零点昌昌 · 发表于 2021-7-5 15:03:21

峰行发表于 2021-7-5 14:15
但是我们的产品并没有被药典收载，讨论结果就是属于方法验证，需要做全面的验证，而不是确认。

是做验证还是做确认，不是看产品，而是看方法。
对于产品，是做方法适用性。
你们怎么讨论出来全面验证的？至少要有条款依据吧。

无云007 · 发表于 2021-7-5 15:45:27

产品没有被药典收载，和使用药典的检验方法不冲突

峰行 · 发表于 2021-7-5 15:51:59

零点昌昌发表于 2021-7-5 15:03
是做验证还是做确认，不是看产品，而是看方法。
对于产品，是做方法适用性。
你们怎么讨论出来全面验证 ...

我一开始也是这么想的，都是按照方法学确认来写的方案，结果领导不同意，要按验证来写，郁闷度飙升

小金库 · 发表于 2022-7-12 20:06:29

非常感谢分享

15026923454 · 发表于 2022-9-20 16:13:30

峰行发表于 2021-7-5 14:15
但是我们的产品并没有被药典收载，讨论结果就是属于方法验证，需要做全面的验证，而不是确认。

确认药典方法是否适合你们的产品，所以是确认，不是验证

halfmoon · 发表于 2022-12-8 16:55:23

峰行发表于 2021-7-5 12:03
方法就是同时上样marker和样品，marker的若干条带的迁移距离和分子量做线性回归，然后将样品的迁移距离算 ...

对的。
可以在standard, sample, 外，再加checking standard (lowest MW. highest MW)
在此测试中，LOQ 的意思不是浓度，而是分子量

halfmoon · 发表于 2022-12-8 17:24:34

同理
GPC （SEC）测分子量时也是如此
标准曲线外加标准样品。比 MW 1K, 5K， 10 K, 20K 30K，做标准曲线，1K, ， 10 K, 30K 做Accuracy，

[方法验证及确认] SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量分析方法验证