几种制作菌种冻存管的方法，选用哪种比较好？

bbjup520

此文章转载与药圈网dada9244文章提问如果有侵权请及时告知，立即删除

第一种：《中国药品检验标准操作规程》2019版430页甘油冻存管保藏法：将待保藏菌接种平板或琼脂斜面，适宜温度下培养适宜时间后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦使细菌充分扩散到预先装于试管中的无菌蒸馏水中，调整菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积、含20%无菌甘油的TSB，轻轻震摇小管，使内容物充分混合，分装于无菌小管，制备好的甘油保藏管最好在-80℃（至少在-30℃一下）储存。

第二种：（网上查找的资料）干菌种（0代）——100ml液体培养基复苏（1代）——加100ml 40%无菌甘油混匀，分装，-20℃或-80℃保存——每次使用取1支自然（室温）解冻（也有人说应放于37℃水浴迅速解冻），取0.1接种至10ml液体培养基按规定培养、稀释（2代）  PS:已经解冻的冻存管不能再冷冻保存，以免冻融！

第三种：-80℃冰箱冻结法   （网上查找的资料）准备冷冻管——准备保护剂（10%-15%甘油）——准备菌悬液——制备冷冻管（取菌悬液和保护剂至冷冻管）——保藏（-80℃，2-5年）     
此方法未详细描述制作细节，在此列出是纠结甘油的百分比，甘油含量过高是否会破坏菌，含量太低是否不能起到保护作用？

第四种：（咨询别的公司）干菌种（0代）——100ml液体培养基复苏培养24h（1代）——划线与TSA平板培养24h（2代）——用无菌接种环轻轻刮取菌苔，挑取菌落加入1%蛋白胨水溶液——加甘油制成含20%的甘油冻存管——在-30℃保存（3代）。

鳄鱼ypz

方便自己即可，这些很难被挑战。但是菌液浓度我没有太作规定，因为有些麻烦

大呆子

我们是按第一种

JarvanWL

第二种比较简单易操作，研究生阶段用，后面工作后也一直用的这种方法。冻到-80℃最好能用异丙醇冻存盒梯度降温，没有梯度降温应该也影响不大。

wangqian1

细菌用的瓷珠保存管保存的，黑曲霉用的甘油保存（以及日常使用的用斜面保存）

bbjup520

我查了很多文件，就只有第一个有明确的指导文件操作，就怕审核老师问起来你的冻存管方法是怎么操作，操作的依据是什么，不可能告诉老师是网上找的方法，为了不做方法学验证，我觉得第一个相对比较好点，问问大家有没有审核老师问过这样的问题

c8xpe

不同的菌种，适合的冷冻保存温度，请问哪里能查到书面的规定呢？