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当下非病毒细胞疗法的实现方法主要包括转座子、基因编辑和mRNA技术。其中,转座子是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位,可以实现稳定的基因转移,且免疫原性和成产成本较低,业内常用的转座子包括睡美人转座子和PiggyBac转座子。
基因编辑技术的发展也为细胞疗法提供一种新的改造方式,这一技术又以CRISPR/Cas9最为常用,能够实现在特定位点插入靶序列或同时敲除多个基因。不过,对靶细胞的基因进行编辑需要将功能组分递送到胞内,非病毒细胞疗法开发过程中可以选择的递送方法包括物理方法(如微注射、电穿孔、核感染和膜变形)和非病毒载体(如脂质、类脂质、聚合物、囊泡等)。
基于mRNA的非病毒细胞疗法主要是利用电穿孔技术或纳米载体将编码CAR的mRNA导入T细胞,并在细胞内被翻译成蛋白质,而mRNA不会在T细胞基因组中整合,也不会随细胞分裂而复制,安全性较高且成本较低。当下,这些技术已经被广泛用于开发非病毒细胞疗法,国内已有多家企业入局。
据统计,已有15家企业公开披露过关于非病毒细胞疗法的信息(如有遗漏,欢迎补充),整体而言国内非病毒细胞疗法尚处于早期研发阶段,不过已初现以CAR-T细胞疗法为主,CAR-M、CAR-NK、TCR-T、TIL多点开花的格局。 |