成瘤性检查法体外细胞测定试验-软琼脂克隆形成

呆呆戴

评估一些细胞的生物学质量属性时，致瘤性是常见的属性之一，而法规文献中提到的对于致瘤性检查有三种：1、裸鼠体内接种-应为阴性；

2、软琼脂克隆形成-应无克隆形成；
3、端粒酶活性-应为阴性。
对于体外细胞活性测定试验-软琼脂克隆形成试验，实验方法很多地方都有内容，连一些具体的细节都能查到，但是该方法的方法学验证却很少，目前主要有一个疑惑，该方法的验证属于哪一类？是属于鉴别反应、定量测定、限量分析、效价测定还是组成测定？
一开始我个人倾向于鉴别反应（[color=rgba(0, 0, 0, 0.78)]软琼脂克隆形成实验通常用于检测细胞的增殖和克隆形成能力，而不是用于鉴别反应。在这个实验中，细胞被培养在含有软琼脂的培养皿中，细胞会逐渐形成克隆并形成可见的克隆形成单位。这种实验通常用于研究细胞生长、增殖和转化能力，而不是用于鉴别不同类型的细胞或物质。）

呆呆戴

顶顶顶，目前更倾向于软琼脂克隆形成实验不适用于鉴别的验证

姣妹崽

呆呆戴 发表于 2024-3-22 10:30
顶顶顶，目前更倾向于软琼脂克隆形成实验不适用于鉴别的验证

药典上好像只看到第一种方法

呆呆戴

姣妹崽 发表于 2024-3-22 11:30
药典上好像只看到第一种方法

是的，动物体内接种，软琼脂克隆实验好多地方都做，但是很少找到完整的验证的

呆呆戴

目前更倾向于属于生物学活性测定这一块

补充内容 (2024-4-7 10:26):
现在公司内部更倾向于将其定位鉴别试验来进行验证，按照ICH Q2(R1)和2020版中国药典 9401 生物制品生物活性/效价（参考生物学活性验证却将其定义为鉴别试验，个人不太理解）测定方法验证指导原则，

补充内容 (2024-4-7 10:26):
最终决定验证项目是专属性，增加检测限和耐用性

蒲公英696670797

下载分享，感谢楼主

Ljqm0mmru

1、药典中对成瘤性检测要求是：体内法是成瘤性评价的标准，但对于某些细胞，也可采用软琼脂克隆形成试验或器官培养试验等体外法检测细胞的成瘤性，特别是对于低代次、在动物体内无成瘤性的传代细胞系。体外法的结果可作为细胞成瘤性评价的参考。所以仅是评价参考
2、从检测方法来看：软琼脂克隆克隆实验，结果是在显微镜下目测观察吧，仅是观察细胞团形态、大小，在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小很多属于鉴别实验，而且这实验对“量”没有要求。
3、还有一点。。。。。。按照活性验证那些要求的验证项目怎么做，可接受标准怎么写