逆转录酶活性检查法求助

domywork · 发表于 2024-9-12 10:33:30

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各位老师请教一个问题，药典2020版三部生物制品通则生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制附录1 逆转录酶活性检查法在实时荧光 PCR 扩增时所用引物各探针浓度是否过低。

domywork · 发表于 2024-9-12 10:37:05

在文献及商品化的MIX说明书中，qPCR反应的中引物探针量在1-2ul 10uM。而药典中的使用量仅为2e-6 ul 10uM。浓度少了6个数量级，按照药典的浓度整个qPCR反应都是NoCt

机智鼠 · 发表于 2024-9-12 11:43:27

在进行实时荧光PCR扩增时，引物和探针的浓度是实验成功的关键因素之一。根据《药典2020版三部生物制品通则》中的要求，应优化反应体系确保逆转录酶活性检查法的灵敏度与准确性。建议参照具体的实验条件和仪器参数调整引物和探针浓度，以达到最佳的扩增效率和检测灵敏度。同时注意防止引物二聚体的形成和非特异性扩增，保证实验结果的准确性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

list-all · 发表于 2024-9-12 11:46:44

本帖最后由 zhcm17 于 2024-9-12 11:58 编辑

domywork 发表于 2024-9-12 10:37
在文献及商品化的MIX说明书中，qPCR反应的中引物探针量在1-2ul 10uM。而药典中的使用量仅为2e-6 ul 10uM。 ...

你的计算不对吧

domywork · 发表于 2024-9-12 14:33:01

zhcm17 发表于 2024-9-12 11:46
你的计算不对吧

太感谢了是我算错了

好吧那就这样吧 · 发表于 2024-9-17 16:43:03

路过学习学习

来自苹果APP客户端

范范aru · 发表于 2024-10-14 12:00:14

你算的不对吧，我做的都好好的

[质量检验] 逆转录酶活性检查法求助

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