同一台液相，色谱条件没有变，前后两次峰面积相差10倍，为什么？

戴杰lig

同一台液相，色谱条件没有变，前后两次峰面积相差10倍，我们已经排查了检测参数，更换的新的氘灯，更换的新的色谱柱，更换了不同的仪器，重新配制了几次流动相和样品溶液，任然比原来小10倍，请各位大神再帮忙分析下是什么原因。


补充内容 (2025-4-23 11:29):
现阶段我们排查到色谱柱，使用我司研发总部的C18色谱柱检测结果就正常，但我们使用了3根新的C18 柱检测还是相差10倍，我们和总部相同活化清洗方式（同厂家、型号，不同批号）；是不是方法耐用性太差，柱子选择性强

机智鼠

同一台液相色谱仪，在色谱条件不变的情况下，前后两次峰面积相差10倍，可能由以下原因导致：

1. **进样系统问题**：手动进样时，可能存在进样量不准确或进样针堵塞的情况。进样量不准确会导致进入色谱柱的样品量不同，从而影响峰面积；进样针堵塞则会使实际进样的样品量减少，导致峰面积变小。自动进样器若出现故障，如洗针液不能有效清洗分析物，可能导致样品残留或交叉污染，影响后续进样的峰面积。

2. **流动相问题**：流动相的组成、比例、pH值等发生变化，会影响样品的保留时间和分离效果，从而导致峰面积的变化。即使重新配制了流动相，也可能存在配制误差或溶剂的纯度、质量不同等问题。此外，流动相中若有气泡，会影响泵的输送精度和检测的稳定性，进而影响峰面积。

3. **色谱柱问题**：虽然更换了新的色谱柱，但色谱柱的性能仍可能存在差异，如填料的粒度、孔径、键合相的覆盖率等。这些差异会影响样品在色谱柱中的分配系数和传质速率，从而导致峰面积的变化。另外，色谱柱的老化、污染或损坏也可能影响其性能，导致峰面积异常。

4. **检测器问题**：检测器的灵敏度下降或故障可能导致峰面积减小。例如，氘灯能量不足、检测池被污染、检测器的电子元件故障等，都会影响检测信号的强度和稳定性，从而使峰面积发生较大变化。

5. **环境因素**：实验室的温度、湿度等环境因素对液相色谱实验有一定影响。温度变化可能会影响流动相的粘度、样品的溶解度和扩散系数等，进而影响峰面积。湿度变化可能会导致仪器部件受潮，影响仪器的性能和稳定性。

6. **样品本身问题**：样品的稳定性差，在放置过程中发生分解、变质或聚合等反应，会导致样品的浓度和性质发生变化，从而影响峰面积。另外，样品的制备方法不一致，如提取效率不同、稀释倍数不同等，也会导致进样样品的实际浓度存在差异，进而影响峰面积。

综上所述，同一台液相色谱仪在色谱条件不变时，前后两次峰面积相差10倍的原因是多方面的。在实际操作中，需要综合考虑各种因素，逐一排查，找到问题的根源并采取相应的解决措施，以确保实验结果的准确性和可靠性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

红烧牛肉面

那你有没有考虑是不是原来的是错误的而这次是正确的呢？

1、流动相检查没错就核对分析参数主要是进样体积
2、采用对照品配制标准溶液，分不同仪器确认是否为仪器进样体积不准确
3、分检测器排查是否是响应值进行了调整（蒸发光散射、紫外检测器、示差等都可以调整响应值）

henryizhao

那个大10倍的样品重新走了吗？

whqiang78

之前遇到过，最后一个个的因素排查，居然是检测器的设置那里让人给改了。

W123309784

换过样品吗；就是已经检验合格的留样样品

wsx

测一下进样体积精密度吧

依然星期三

波长是不是被人改了

羽遥

建议检查一下仪器参数，进样体积设置，跟你实际的进样针体积是否一致

丹参

响应值是不是调整了

mojun

进样器检查了吗，排气泡了吗？重新校针了吗？大10倍的样品复测了吗？连续进样结果稳定吗？复测标准品溶液含量和100%差得多吗？

17366931996

前两天碰到类似问题，大概率是人为因素。重点看哈参数是否更改

戴杰lig

红烧牛肉面 发表于 2025-4-18 10:18
那你有没有考虑是不是原来的是错误的而这次是正确的呢？

1、流动相检查没错就核对分析参数主要是进样 ...

上面您说的，我们都排查了，进样精密度度也做了

戴杰lig

17366931996 发表于 2025-4-20 11:02
前两天碰到类似问题，大概率是人为因素。重点看哈参数是否更改

排查了仪器参数没有问题，和原来的一致

戴杰lig

17366931996 发表于 2025-4-20 11:02
前两天碰到类似问题，大概率是人为因素。重点看哈参数是否更改

好的，我们已排查没有问题，谢谢！

戴杰lig

mojun 发表于 2025-4-18 16:03
进样器检查了吗，排气泡了吗？重新校针了吗？大10倍的样品复测了吗？连续进样结果稳定吗？复测标准品溶液含 ...

进样器排查了，也做了20针的重复性，结果很好

戴杰lig

依然星期三 发表于 2025-4-18 12:51
波长是不是被人改了

排查了，没有的

卫公检测技术

老柱正常新柱不行，把新柱放总部跑一下试试排除是不是柱子问题

mojun

戴杰lig 发表于 2025-4-23 11:19
进样器排查了，也做了20针的重复性，结果很好

用外标法计算含量一致吗？
怀疑色谱柱检测柱效、理论板数，PDA检测峰纯度、光谱图上是否有杂质