检测时老是发生个别样品降解，求助原因

长安ash

最近在做一个产品的检验，尤其是做溶出曲线的时候（溶出样品较多发生概率大一些），总是会突然出现一两针的峰面积异常，主峰降解，杂质峰增大。比如有一次对照品0h 峰面积4.35，6h降到4.2，后面基本就不动了，20h峰面积大概4.15；还有一次pH4.5介质的溶出，60min时有两针异常，别的有10针峰面积都在7.2-7.3左右，这两针峰面积6.8-6.9左右。

换了新买的安捷伦进样小瓶还是会出现这种情况。

做了强降解，酸、碱、光照、高温，都会降解，碱和高温稍微稳定一点，光照降解的最严重。所以都用的棕色进样小瓶。

有怀疑是进样小瓶的问题，但问题不是每一个瓶子都这样，偶然碰到某个小瓶才会出问题，其他瓶子里的就没事

有没有碰到过类似的问题，实在分析不出来原因了...有啥解决办法

lipi

不懂帮顶，坐等大佬解答

Doo1

小瓶没刷干净吗

鬼使神差

小瓶有没有可能吸附

可亲可爱

峰面积都这么小的吗？

红烧牛肉面

蹲

fanzz19880326

不懂帮顶，坐等大佬解答

长安ash

可亲可爱 发表于 2025-7-10 11:14
峰面积都这么小的吗？

对，很小 是两浓度，1.1μg、2.2μg/ml

可亲可爱

长安ash 发表于 2025-7-10 11:20
对，很小 是两浓度，1.1μg、2.2μg/ml

基线稳定吗？浓度这么低，基线波动就可以对峰面积造成影响的

blunk

光照降解是强光还是普通光？，样品及制样过程有没有控制？

世间始终你好

你描述的这个情况非常典型，溶出过程中**峰面积异常波动（主峰降低、杂质升高）**，**偶发性发生、与小瓶相关但不规律**，结合你所做的排查（强降解、换棕色小瓶），有几个方向可以进一步深入分析：

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可能原因分析

1. **进样小瓶材质问题或吸附作用**

* 即使都是安捷伦的棕色小瓶，不同批次的小瓶可能存在微小差异，比如：

  * 内壁是否为**硅化处理**（部分未硅化的小瓶内壁更容易吸附疏水性成分）
  * 玻璃本身的**金属离子迁移**或微量碱性（如Na+）造成加速降解或催化反应
* **解决建议：**

  * 更换为**硅化玻璃进样瓶**或专门标注“惰性处理”的瓶子（如Agilent的certified vials）
  * 更换为**聚丙烯小瓶**（PP材质）试试看是否还能出现波动

2. **盖垫（Septum）材质问题**

* 你有没有留意**瓶盖垫片的材质**？PTFE/Silicone通常稳定，但某些类型（特别是单层橡胶、或非PTFE包覆的）可能会与溶液发生反应或吸附。
* 尤其是在**高温自动进样器**中放置时间较久，盖垫可能释放微量杂质导致峰漂移或主峰降低。
* **建议：**

  * 使用**PTFE/Silicone双层盖垫**，避免使用未知材质盖垫
  * 尝试改用螺纹盖而非压盖，确保密封性和一致性更高

3. **样品在小瓶中进一步降解**

* 你提到对照品 0h 到 20h 有轻微下降，如果不是设备问题，可能是：

  * **溶液在进样瓶中放置时间过久**
  * 光照（即使是棕瓶）、温度波动、氧化等导致缓慢降解
* **建议：**

  * 尽量减少样品在进样瓶中的放置时间，做完立即进样
  * 自动进样器温度设定如过高（如室温或更高），可考虑设定**冷却托盘**

4. **进样针/自动进样器交叉污染或死体积问题**

* 有时候不是小瓶的问题，而是：

  * 进样针针头有污染残留（比如有一次性吸附了某种降解产物）
  * 死体积区域不易清洗干净
* **建议：**

  * 清洗进样针（用纯乙腈/甲醇/0.1%TFA/水交替冲洗）
  * 排查是否某一特定通道/针位频繁出问题

5. **pH介质本身不稳定或与玻璃反应**

* pH 4.5 的溶出介质若长期在瓶中与玻璃接触，也有可能发生pH漂移或与玻璃中某些微量组分反应
* 特别是在**长时间溶出测试**中，这种变化会影响峰面积

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推荐应对措施（总结）

| 建议          | 说明                              |
| ----------- | ------------------------------- |
|  更换小瓶材质    | 尝试**PP材质小瓶**、或**硅化玻璃瓶**         |
|  更换盖垫材质    | 使用**PTFE/Silicone双层垫片**，确保不释放杂质 |
|  快速进样      | 尽量减少样品在小瓶中停留时间，避免放置过久           |
|  进样器冷却     | 检查并适当设定自动进样器托盘温度                |
|  定期清洗进样针通道 | 用乙腈/甲醇/水多次清洗，排除死体积残留            |
|  对异常小瓶做标记  | 如果某瓶多次异常，建议废弃，不重复使用             |

类似经验补充（来自行业实操）

* 有过一个项目，溶出时在10针中只有第5针总出问题，后来发现是**自动进样顺序问题**：仪器在某几个针位有微小漏液或反抽气泡，导致进样体积偏小或带入空气。
* 也遇到过**小瓶贴标签后掉胶溶入溶液中干扰色谱**的问题——标签胶渗进样品中（尤其高温托盘中）。
如果你愿意，可以提供一下：

1. 小瓶品牌和型号（如Agilent哪一款？是否有证书？）
2. 溶出液详细组成（pH调节方式、是否有缓冲盐）
3. 色谱条件（流动相、柱子、检测器）

我可以更细致分析看看是否有配伍或方法学问题。

A110

蹲个解答

Mothong

就根据提供信息，可能的原因太多了，是否实验过程中都严格把控了？但是有两点可以确认，响应低、有降解；根据这两点给出两个建议考虑下
峰面积4.35和4.15差别大吗？想想办法把响应增大点？例如用UPLC;
在就是降解成什么能知道吗？是否可以积分将其校正回来？

annaline225

世间始终你好 发表于 2025-7-10 11:27
你描述的这个情况非常典型，溶出过程中**峰面积异常波动（主峰降低、杂质升高）**，**偶发性发生、与小瓶相 ...

这是高手，学习

长安ash

Mothong 发表于 2025-7-10 14:15
就根据提供信息，可能的原因太多了，是否实验过程中都严格把控了？但是有两点可以确认，响应低、有降解；根 ...

主峰前面有个杂质峰明显增大了，每次降解都是。
4.35到4.15这个 我们一共做到27h，RSD算出来2.2%了。没问题的时候RSD都在1%以下。
我们线性做出来还挺好的，最低做到0.几μg了
积不回来，出现好多次了，溶出曲线里面莫名其妙就有一两针降解的很突出，唉

世间始终你好

annaline225 发表于 2025-7-10 14:24
这是高手，学习

chatgpt厉害

长安ash

blunk 发表于 2025-7-10 11:26
光照降解是强光还是普通光？，样品及制样过程有没有控制？

操作全程避光了，用棕色小瓶。每次只是个别进样瓶里的样品异常

胜利者

加快取样稀释过程、避光

白一书生

想问一下，楼主的问题解决了吗