求助：蛋白质纯化

忆暑 · 发表于 2016-10-28 09:21:44

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最近做蛋白质纯化，得到的峰值很低，而且洗脱时间变得很长，以前做的都没有出现这种情况，请问有没有人知道如何解决？

zsf19880416 · 发表于 2016-10-28 09:41:02

重新测定下分配系数，极有可能固定相的分配系数变大，Rf值变小。好好检查下柱子的固定相以及洗脱溶剂的比例。希望对你有用。

水手波波 · 发表于 2016-11-3 15:48:18

原先我们我们是检查：柱子反洗平衡，上样浓度，洗脱速度，温度，洗脱液成分和ph。

清风许来 · 发表于 2016-11-7 17:29:04

谢谢　　好资料
感谢楼主的分享

Pyc1309090237 · 发表于 2016-11-23 10:43:09

不知道你梯度还是什么的，建议你先检查泵流苏，PH和配比。

忆暑 · 发表于 2016-11-24 09:49:59

Pyc1309090237 发表于 2016-11-23 10:43
不知道你梯度还是什么的，建议你先检查泵流苏，PH和配比。

谢谢您的解答。我的梯度什么的都是按照以前的那个操作的，以前的实验结果正常，但是现在出现了上面描述的现象

wening · 发表于 2017-7-2 12:29:49

纯化介质是什么？如果柱效测了没问题，缓冲液配制也没问题，可能就是样品本身有问题，出现聚合等。

快乐亦乐 · 发表于 2017-7-7 06:43:18

有监测柱后电导和pH可以跟之前对比一下，看洗脱缓冲液有没有异常，如果没有分析下柱效，洗脱峰低洗脱体积大，主要是洗脱缓冲液洗脱能力变差或柱效差扩散严重导致，供参考