菌种保存

你得不到的人

菌种斜面无保护剂，直接在-20摄氏度保存了12个小时，传代还能活吗

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没这么操作过，你可以试试。理论上，应该死不了。不过，你斜面放冷冻干嘛呢？！

你得不到的人

接收的时候保存不当，误放了一晚上

柯基的狂热粉丝

你得不到的人 发表于 2025-6-24 12:43
接收的时候保存不当，误放了一晚上

可以拿出来划个板看看

生鱼汤

菌种低温不会死，但是斜面的琼脂会变性，赶紧重新接种到新的斜面上

你得不到的人

好的，ヾ(≧≦谢谢≧≦)ノ

18111504659

菌种斜面若未添加保护剂（如甘油、脱脂牛奶等）直接在 -20℃ 冷冻保存 12 小时，其存活率和传代能力将受到显著影响，具体分析如下：

1. 无保护剂冷冻的损伤机制
冰晶损伤：
-20℃ 冷冻时，细胞内外水分形成冰晶，直接刺破细胞膜/壁（《制药工艺验证实施手册》17.4.3.3）。
溶液效应损伤：
冷冻过程中胞外溶液浓度升高，导致细胞脱水死亡（《中国药典》四部“生物制品生产检定用菌毒种管理”）。
代谢毒性物质积累：
低温下代谢产物无法排出，造成细胞内中毒（《微生物菌种保藏技术指导原则》）。
2. 不同微生物的存活可能性
微生物类型        存活可能性        原因
细菌营养体        极低（<10%）        无保护剂时，-20℃ 冰晶可彻底破坏细胞膜（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）。
细菌芽孢/真菌孢子        中等（30~50%）        芽孢/孢子具厚壁，对冷冻有一定耐受性（如枯草芽孢杆菌、黑曲霉孢子）（《02-1-23年版指南：QC.pdf》）。
酵母菌        低（10~20%）        细胞壁较薄，易受冰晶损伤（如白色念珠菌）（《2010版—无菌制剂GMP实施指南》）。
3. 复活传代的风险
存活菌种性能下降：
可能发生 遗传变异（如毒力减弱、代谢特性改变）（《生物制品生产检定用菌毒种管理规程》）。
污染风险增加：
部分死亡细胞释放营养物质，促进杂菌生长（《微生物检验实验室质量控制》）。
传代结果不可靠：
即使部分复活，其生长特性（如代时、产率）可能与原始菌种不一致（《菌种保藏管理SOP》）。
4. 处理建议
废弃冻存斜面：
无保护剂冷冻的菌种 不建议用于传代或生产（《药品GMP指南：质量控制实验室》）。
启用备份菌种：
从 主种子批（如液氮冻存管）重新复苏，确保生物学特性稳定（《中国药典》四部“生物制品通则”）。
补充保护剂后保存：
若需长期保存，应添加 20%~40%甘油 或专用冷冻保护剂，于 -70℃ 或液氮 保存（《Protect微生物保藏系统》说明书）。
结论
不能存活传代。无保护剂在 -20℃ 冷冻 12 小时将导致大多数微生物死亡或严重损伤，复活后无法保证遗传稳定性。建议废弃该斜面，启用备份菌种并规范保存。