一抗体类蛋白在纯化过程中纯度偏低,该从哪些方面进行调查?

yang_jur

一抗体类蛋白多批次在纯化过程中:疏水层析高分子含量偏高,接着离子层析主峰SEC-HPLC纯度偏低.
请问大家,这该从哪些方面进行调查? 谢谢!

LK8275610

你这顺序颠倒啊，先离子在疏水是个正常逻辑

LK8275610

你应该找下亲和层析的胶

LK8275610

或者 分子筛+疏水

LK8275610

人气怎么差啊，主要是离子层析分辨率不高，但浓缩作用明显，作为第一步层析还可以，第二步效果不明显

药仙

你可以@大呆子

LK8275610

药仙 发表于 2014-8-12 13:36
你可以@大呆子

@仲夏秋夜云  

LK8275610

药仙 发表于 2014-8-12 13:36
你可以@大呆子

呆总不是这个专业的

药仙

LK8275610 发表于 2014-8-12 14:04
呆总不是这个专业的

哦谢谢提醒

仲夏秋夜云

估计这个可以在疏水层析收峰前加一步洗杂
或者把离子交换收峰的盐浓度降低些

yang_jur

谢谢大家,是想找原因改进,但不能改工艺

yongyong208

简单说下你的工艺流程，你不会想2步就纯化完成吧？
另外，你的目的是什么，是想制备点蛋白做研究，还是开发下游纯化工艺？这是2个概念，工艺设计也不一样。

疏水层析高分子含量偏高 是什么意思？聚集体含量高？如果你是做工艺开发，建议第一步还是protein A亲和层析，现在第一步不是亲和的申报都会被质疑。

离子交换需要进行工艺优化：load pH，load cond，load capacity，wash pH，cond，elution pH，cond，如果离子交换SEC纯度，建议进行优化，或者DOE筛大范围，再优化。

我用50um的离子分mAb的charge variant，能够去掉27%的 basic component及5%的acidic component，收率还能在55%左右。优化很重要。

燕斌

谢谢版主，顶一下啊啊啊啊