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[检验及监测] 全国药品微生物检验及控制技术高级研修班-培训总结(2014年第二期)免费下载

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药徒
发表于 2014-11-12 13:19:13 | 显示全部楼层
三 洁净监测技术及《中国药典》2015版洁净监测指导原则解析-张亚杰
1. 《中国药典》2015版洁净监测指导原则 只适用于药品分析实验室
2. 指导原则不是强制性附录(分前言、人员、确认、监测、微生物控制五部分)
3.各级别洁净环境物理参数建议标准及最长监测周期
洁净度
级别        过滤完整性        气流组织        空气流速        换气次数        压差        温度        相对湿度
A        检漏实验监
测周期
24个月        单向流
监测周期
24个月        0.25-0.5m/s
监测周期
12个月        ——        洁净区与非洁净区之间≥10Pa
不同洁净区之间压差≥10Pa

监测周期每周一次        20-24℃
监测周期
每次试验        45-65%
监测周期
每次试验
B                ①        单向流(静态)监测周期24个月
②        非单向流
——        ①单向流(静态)0.25-0.5m/s
监测周期
12个月
② 非单向流
  ——        ①单向流
——
③        非单向流
④        40-60h-
监测周期12个月1                       
C                非单向流
——                20-40h-
监测周期
12个月                       
D                非单向流
——                6-20h-
监测周期
12个月                       
4.监测所用培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA),当监测结果有意思真菌或考虑季节因素影响时,可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)。
  培养时间对比表                                  15版药典后环境监测碟培养至少3天
名称        ChP(2015)        GB/T 16293-2010
TSA        3天        不少于2天
SDA        5天        不少于5天
       建议:生产过程也适当延长沉降菌碟的培养时间。
5.P78 表2 推荐的药品洁净实验室的监测频次及项目(菌检室人员重点看)
6.无历史数据的实验室浮游菌、沉降菌警戒限、纠偏限制定(P80)
7.建议对受控微生物环境的微生物进行到“种”水平的检测,且关键区域分离的菌落优先鉴定。
8.微生物监测的重要性-P95(扫描页)
9.目前悬浮粒子监测方法(光散射发-常用、光衍射法、光学显微镜法):悬浮粒子数是洁净环境定级的依据(其它如浮游菌、沉降菌等均为该级别的监测指标)
  仪器的校准:应符合JJF 1190-2008的标准
10.浮游菌监测:采样器主要有被动沉降类、动力分离类、其他类别(国标法采用的是狭缝式、离心式或真空式动力分离原理);选择采集器时应注意灵敏度、采样效率、可重复性、使用方便、利于微生物存活等特性
11.浮游菌监测时应注意,采样器消毒后先不放入培养皿,开启仪器至少5min后,使消毒剂完全蒸发后采集。
12.沉降菌:
12.1 用于环境监控的培养基须特别防护,最好双层包装和终端灭菌,如不能终端灭菌,那么在使用前应进行100%预培养以防止外来污染物带入环境中及避免出现假阳性。
12.2沉降菌碟暴露失水会导致降低某些微生物的生长能力,研究表明,单向流暴露4小时,平板失重16%;故而最后选择1~2小时更换一次,累积计数。
12.3 进入A级的平板,三层透明包装是最合适的。
12.4进入隔离器的平板其最内层包装必须是过氧化氢蒸汽不可渗透的,以免假阴性。应使用为隔离器设计的培养基平板。
12.5日常监测:老师的建议是每次、每个区域都要有阴性对照;A级区域采样点数目不小于3个且每个点平皿数不小于一个。
13表面微生物监测后,应使用消毒剂或杀孢子剂擦拭以清除培养基的残留。
14.表面微生物监测方法验证时应注意取样回收率应在50%-200%范围内,各种表面均应在生物安全柜内被模拟;计数方法验证应考虑抑菌成分的影响。
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药徒
发表于 2014-11-12 13:19:36 | 显示全部楼层
四 无菌药品生产过程中的微生物控制及验证要素-马义岭
1.药物污染及降低风险举例(P131)
2.关键区域人员的验证要素(人员更衣验证、无菌操作模拟验证、消毒剂效果验证、人员表面微生物监测、定期无菌操作模拟、无菌操作考核)
3.更衣程序验证策略(P145)
4.洁净室的灯光照明系统宜采用内嵌至棚顶的吸灯,和棚顶同面,利于清洁。
5.设备微生物污染示例(P154)
6.制药用水微生物限度参考值(表中把各种水都定了警戒、纠偏,并进行定期监测)P157
7.建立菌落地图的方法(P161)
8.消毒剂选择(P169)
9.消毒剂应有微生物负荷检验、质量标准、检验报告
10.USP 1072 适用于生产环境的消毒剂相关内容分析(P177)
11.国内消毒剂验证可参考的标准: GB 15981-1995 第三篇 液体消毒剂消毒效果评价方法与标准
12.建议洁净室的清洁、消毒应采用“双桶法”。
13.介绍了微生物在线检测技术(传统的缺点、在线检测原理、系统验证)、环境监测系统的组成

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药徒
发表于 2014-11-12 13:20:02 | 显示全部楼层
五、无菌检查及疑似结果的溯源性调查-戴翚
1.洁净室使用次数与浮游菌的关系(6~8月微生物繁殖旺盛是之一,还有近三年开始的国抽集中在这段时间检验,使用频率增大、样品增多等原因)
2.环境微生物归属方法(附件2)
3.感染性微生物相对危险度等级:2级(配备生物安全柜 II A2即可),A2生物安全柜结构图(P216)
4.隔离器与传统洁净技术的比较(P221)
5.微生物实验室常用菌株(附表3)
6.两个说法:G-球菌一般在医疗中的人感染分离出来;G+球菌一般在实验室、空气介质中常见(非观点)   G-杆 水、液态药液……
7.微生物检验的方法适用性试验(微生物检验方法的验证试验涉及较多方面内容,企业只需要进行检验方法的适用性确认)
① 样品制备过程(表面活性剂、中和剂的微生物无毒性、处理方法的微生物兼容性)
②样品检查过程(可用的去除活性或中和活性的方法)
新建方法              →方法验证与方法适用性
药典方法              →方法转移与方法确认
(其他成熟方法)      ( 部分菌株的验证)
有案可查、溯源性;建立实验室自身的方法依据体系
其它:准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、粗放性
8.常用中和剂(0.1%大豆卵磷脂、0.7%吐温80)
  卵磷脂、吐温及L-组氨酸用于中和醛类、酚类及季铵盐类化合物
  卵磷脂中和氯已定,吐温80中和双三氯酚及汞化合物
9.表面活性剂HLB值越接近20,其亲水性越强;相反,越接近于0,亲油性越强
10. 薄膜过滤法冲洗时,最好采用分次(100ml/次)的方法,以提高方法的回收率(P234)
11.菌种传代推荐保存方式:-80℃,甘油:肉汤=1:1或者甘油:TSA=1:1的1~1.5ml冻存管保存。
  应选取增殖体(调整期、对数期、稳定期、衰亡期)。
0.5麦氏浊度的相当于106CFU,可比例稀释得到102悬液。
12.菌种从保藏中心获得0代后,第一代就可以用作工作菌株(WHO的规定)。
13.可参考的工作菌株保藏流程图(P235)。
14.建议使用无菌级过氧乙酸喷雾手消器。
15.三联集菌器较合适,最多浪费一桶(两个阴性、两个样品、一个或两个阳性桶)。
16.原始记录列好下列信息:
  样品信息(表头)&方法信息、仪器信息及状态、检验结论(前置,便于核对)、校对&复核信息(前置)、材料信息、试剂信息、培养基信息、检验方法/过程描述、检验结果记录、过程监控信息(监控方案、培养调剂、培养结果)、是否有偏差及变更等
  偏差调查表包含:样品信息、环境保障调查、仪器运转、环境监控、检验操作调查、培养基、检验用具、阴性、阳性、操作细节、结果判断调查等。
17.结果判断
          前提:阳性必须显示阳性反应,阴性必须无菌生长。
供试管浑浊,即判定不合格
除非能证明实验结果无效,即生长的微生物非供试品所含,如:
设备、环境的微生物监测结果超标,分离得到同属菌
回顾实验过程,发现污染因素
鉴定微生物确认是操作引入的
无菌试验经确认无效,可以重试。

18. 葡糖糖酸钙注射液与氯化钠注射液 安瓿表面杆菌污染案例(p243)引申,外表消毒方式表
安瓿表面消毒方案比较表
a.        杀孢子剂(过氧乙酸)喷洒后立即(3、5、10min)用75%乙醇钝化,再用湿棉签擦拭取样
b.        酒精灯过火1s(3、5、10s)直接用湿棉签擦拭取样
消毒方案        作用时间        残留菌落数        菌属类型
杀孢子剂        立即        2cfu        Bacillus(杆菌)
        3min        0       
        5        0       
        10        0       
过火        1s        4        Bacillus(杆菌) Brevibacillus(短小芽孢杆菌)
        3        10        Bacillus(杆菌) Brevibacillus(短小芽孢杆菌)
Penibacillus(类芽孢杆菌)
        5        0       
        10        0       

实验表明,杀孢子剂具有较好的表面消毒能力,过火的经典方法应至少过火5s以上。
19.保证药品微生物检验结果可靠的有效途径及无菌溯源调查(决策图)


20.微生物警戒限与行动限的意义
  从污染微生物的种类、数量进行分析,了解环境情况的潜在的变化,及时分析原因,采取行动,使环境保持在要求的条件下。
a.        若微生物数量远低于警戒限,应考虑限值的合理性
b.        若微生物上升趋势明显,应考虑操作、清洁流程是否合理
c.        若微生物波动剧烈,应考虑多次操作之间的一致性
d.        若重复出现同样或相同类型的微生物,应考虑
评估消毒剂的有效性    评估清洁操作流程的合理性
21.欣弗事件污染了三种菌:不光灭菌参数的问题,检出了肺炎亚种,以及很小的黏质沙雷菌。
  洁净环境常见污染菌:头状葡萄球菌、溶血葡萄球菌、缓症链球菌、科氏葡萄球菌、藤黄微球菌、山羊葡萄球菌
22.微生物鉴定原则(P250)
23.常见微生物菌落特征(P251)
24.革兰氏阴性菌的KOH拉丝实验(P253)
25.细菌鉴定技术介绍(P255~262)
26.刺五加事件的真实结果(相关性,菌落鉴定局限性……),FDA的黑曲霉是巴西曲霉,根本不是黑曲霉,国家菌种保藏中心的才是。
27.中检院的药品污染鉴定方案(了解,P265 双黄连注射液事件)
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药徒
发表于 2014-11-12 13:20:46 | 显示全部楼层
六、培养基质量控制及Ch.P 2015 微生物限度检查法---杨美琴
1.微生物检查的内容
  无菌、微生物限度(药品、pw、wfi)、抑菌效力、环境监控,后三者的结果是由培养基来实现富集和点计的。
2.提醒注意第三次意见稿
3.微生物限度检测法  计数法体系、控制菌培养基体系、、最大可能计数法、限度标准以指数计、不再规定复试而是结合实验室调查回顾分析结果的准确性
4.中和剂的选择方案(P287)
5.新方法规定的计数方法回收率(50%~200%)
6.计数方法实验注意事项(P289)
7.关于结果判断(演示,待正式版详解)
修订后,以指数形式表述标准,并以2倍因子进行控制,对结果判断有影响(检出能力高了,标准也“宽”了(统计学意义上讲更科学了))
例子:
样品        标准(cfu/g)        结论        结果1        结果2        结果3
样品1        霉菌及酵母菌数 100        合格~不合格        80        90        160
        TYMC         102        合格                       
样品2        细菌数         1000        不合格        1300        1500        1100

        TAMC          103        合格                       
102最大可接受限为200,103最大可接受限为2000,依次类推
8.计数方法适用性很关键(误差案例 P291)
9.计数方法本身有局限性(数越小误差越大)
USP36<1227>计数偏差: 25~30cfu/皿 RSD20%~18%
    细菌及酵母菌计数范围  25~250 cfu/皿   霉菌计数范围8~80 cfu/皿
10.7种控制菌检查中,梭菌和白念没有变化,其它5种有变化,使用无选择性增菌培养基(TSB)培养,使受损细菌得到修复,提高检出率。
11.关于大肠菌群(P295)
12.几个阳性菌的特点(P296~304)
13.包才的微生物控制水平、判断指标与药品不同(P317 菌检室重点学)
14.水微生物限度检查法(P319~326),介绍原理、培养基寡营养、研究对比、适用性检查
15.抑菌效力检查(略,验证主管、微生物主管自学)
16.培养基质量控制(P335~346)各种成分及目的或作用。
微生物实验室规划---马仕洪
1.        国内案例的启示
2.        新版药典的实施要求(药品微生物实验室规范指导原则 13要素)建设原则
3.        GMP实施理念转变   过程控制是重点,而不能仅靠最终检验,微生物实验室要想过程控制分析能力(微生物调查分析型实验室)的方向提高
4.        什么样的实验室(P355、P358、P361)
5.        金黄色葡萄球菌-葡萄球菌属-葡萄球菌科-芽孢杆菌目-芽孢杆菌纲-厚壁菌门-细菌域
提示企业要注重环境菌库(检验、生产)的建立、环境菌的鉴定能力的提高
6.        菌液获得方式(P373)
7.        OOS调查提示(P374~375)
8.        微生物鉴定水平(P379 表观<菌株采集、纯化  菌落、细胞形态观察 革兰氏染色 鞭毛动力>-生化<产气、产酸碱、分解酶、变色>-分子<PCR、糖链、红外、质谱、>)


附件1  微生物检验过程中的关键点过程控制


附件2  环境微生物归属流程图

附件3. 微生物实验室常用菌株








点评

谢谢你顶贴,不过现在已经免费了。  详情 回复 发表于 2014-11-12 18:54
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药徒
发表于 2014-11-12 13:22:02 | 显示全部楼层
以上内容是本帖附件内容,图片欠奉。公开多好,扩大交流,买一个这个,还要别人买,真受罪

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你的建议我收下了,下次发帖纠正,这次帖子不让改了,没有权限。。  详情 回复 发表于 2014-11-12 14:35
你的建议我收下了,下次发帖纠正,这次帖子不让改了,没有权限。。  详情 回复 发表于 2014-11-12 14:35
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药徒
发表于 2014-11-12 13:24:24 | 显示全部楼层
怎么看不到内容
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药仙
 楼主| 发表于 2014-11-12 14:35:33 | 显示全部楼层
小城事多 发表于 2014-11-12 13:22
以上内容是本帖附件内容,图片欠奉。公开多好,扩大交流,买一个这个,还要别人买,真受罪

你的建议我收下了,下次发帖纠正,这次帖子不让改了,没有权限。。
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药仙
 楼主| 发表于 2014-11-12 14:35:39 | 显示全部楼层
小城事多 发表于 2014-11-12 13:22
以上内容是本帖附件内容,图片欠奉。公开多好,扩大交流,买一个这个,还要别人买,真受罪

你的建议我收下了,下次发帖纠正,这次帖子不让改了,没有权限。。
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药士
发表于 2014-11-12 14:48:32 | 显示全部楼层
感谢分享,看来好评不少!
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药徒
发表于 2014-11-12 16:35:17 | 显示全部楼层
这次没去参加新药典的培训,先在这学习下
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药徒
发表于 2014-11-12 16:52:59 | 显示全部楼层
不错不错,谢谢分享
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药仙
 楼主| 发表于 2014-11-12 18:54:24 | 显示全部楼层
小城事多 发表于 2014-11-12 13:20
六、培养基质量控制及Ch.P 2015 微生物限度检查法---杨美琴
1.微生物检查的内容
  无菌、微生物限度(药品 ...

谢谢你顶贴,不过现在已经免费了。
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药徒
发表于 2014-11-16 16:18:47 | 显示全部楼层
大自然的搬运工,要滴要滴

点评

这你也参加,你不是有了吗,在我共享有,我培训后不是告诉了么、  发表于 2014-11-18 21:08
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药徒
发表于 2014-12-5 13:14:07 | 显示全部楼层
顶贴赚积分啊~~~~~~~~~~
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药徒
发表于 2015-2-7 10:19:02 | 显示全部楼层

附件看了,很不错,值得下载,期待后续大作
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药徒
发表于 2015-2-8 15:39:35 | 显示全部楼层
我想看看是不是有用
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药徒
发表于 2015-2-8 16:21:29 | 显示全部楼层
好好,很好的东东,长知识了.
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药徒
发表于 2015-2-26 17:40:09 | 显示全部楼层
谢谢分享!!!!!!
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药徒
发表于 2015-2-27 10:35:51 | 显示全部楼层

来看看什么好笔记。
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药徒
发表于 2015-6-10 22:05:32 | 显示全部楼层
听他们讲课是一种享受
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