层析柱清洁验证怎么做？

qa0633

谁知道层析柱清洁验证怎么做，主要是吸附杂蛋白作用。

hongwei2000

个人建议
清洁后按照产品的洗脱程序收集洗脱液
进行检测
必要时做适当浓缩
以符合检测的灵敏度

qa0633

hongwei2000 发表于 2015-7-31 16:21
个人建议
清洁后按照产品的洗脱程序收集洗脱液
进行检测

再生清洗后测蛋白质含量，很高，不理解，用的GE的，清洗再生方法按说没问题。困惑

hongwei2000

qa0633 发表于 2015-7-31 16:37
再生清洗后测蛋白质含量，很高，不理解，用的GE的，清洗再生方法按说没问题。困惑

不能按说呀
你要知道你层析前的成分都有哪些
再测一下清洁液中有哪些残留
再想办法除去残留物
有些蛋白是特异性结合在层析柱上的

qa0633

hongwei2000 发表于 2015-7-31 16:46
不能按说呀
你要知道你层析前的成分都有哪些
再测一下清洁液中有哪些残留

方法是ge推荐的，真搞不清有几种杂蛋白。

hongwei2000

qa0633 发表于 2015-7-31 17:04
方法是ge推荐的，真搞不清有几种杂蛋白。

谁推荐也不好使
关键是你的杂蛋白与别人是不一样的
用色谱或电泳比对一下是哪个成分
针对那个成分再去想清洁的办法

qa0633

hongwei2000 发表于 2015-7-31 17:07
谁推荐也不好使
关键是你的杂蛋白与别人是不一样的
用色谱或电泳比对一下是哪个成分

没研究那么深，也不知道以前是否研究过

klanfang

？这也叫清洁验证？！

一座木桥

清洗方式也是有很多种的

jackieustc

有另外一个帖子清洁验证介绍过，TOC通用，你的杂蛋白没洗干净，你用什么方法检测的，如果常用方法都能检测到，那就很严重了。还有每次做完后总是一些东西在长期浸泡中出来，也不要怕，层析清洁不是绝对的，个人见解呵

zwwypj

不是清洁验证吗？使用完毕清洁后怎么会有杂蛋白，应该是干净的呀，一般按照规程清洁后检测最终收集水或溶液测微限，toc.,doc指标和达到使用的缓冲液检测指标就证明清洁效果ok

zc320320

PDA14应该有帮助

方利福

直接法：清洗（再生）后打开取介质检测；
间接法：清洗（再生）后模拟产品层析层析上样、洗脱，到蛋白洗脱这一步取样检测。注意模拟时上样这一步只上样品的缓冲液（不含蛋白），其余的洗脱步骤与正常程序使用相同的溶液。
以上是我自己琢磨出来的，没有出处，仅供参考

Doitasyoulike

这种杂蛋白太多，可以使用非专属性方法，例如TOC
具体的限值建立方法可以参考PDA TR49所描述的TOC方法，例如4.1.2中举例上游TOC 5-10ppm和下游TOC 1-2 ppm
当然严格来说，需要从多种角度例如毒理学、治疗剂量等来评价限度建立的合理性，正如PDA这份报告中所说的，如果选择最终冲洗WFI的限度为500ppb的话，这样是可以接受的，但是必须证明按污染计算的TOC标准没有这个限制严苛才行

gin

非专属方法就是测淋洗水中的TOC咯？或者TOC加电导率之类的。
但是，非专属方法如何证明填料被冲干净了？下游淋洗水TOC合格，可能只是柱上的蛋白没被冲下来呢？
是否需要考虑淋洗水回收率问题 ，PDA技术报告上有提到。
另一个可能可行的方法是不测淋洗水，而是通过测洗脱液或者平衡液的TOC，但又有一个问题，那就是样品本身的噪音可能比较大，样品和阴性对照间如何判定两者一致。