BP、EP布洛芬杂质检测

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各位，谁有做个BP布洛芬片、EP布洛芬杂质的朋友，我这边有个关于保留时间的问题想咨询下大家。布洛芬杂质，使用EP(BP)方法配制的流动相、HPLC方法、EP规定的色谱柱品牌，
怎么主峰的保留时间就是大于药典规定的21min，达到了30min
不知道怎么回事，而且EP、BP、印度药典都是一样的方法，都是规定的RT21min


大家做过这个产品的，说说有哪里需要注意的地方吗

klicking

你的色谱柱是250mm的么？

风流令狐冲

这个是这样的 保留时间会推迟到30min  下面这个图片是哪个网站上的 ？

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klicking 发表于 2015-8-27 12:28
你的色谱柱是250mm的么？

150×4.6mm，5μm的色谱柱，同药典方法完全一致，就是保留时间不一致，而且BP、EP、印度药典都是一样的方法，一样的保留时间要求

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风流令狐冲 发表于 2015-8-27 12:49
这个是这样的 保留时间会推迟到30min  下面这个图片是哪个网站上的 ？

你们做过这个产品吗，我在网上看见了哈药6厂的一个论文，也是按照BP布洛芬片（类同EP布洛芬）的方法进行的有关物质检测，保留时间规定也是20min，哈药的做出来差不多也是28min

hongwei2000

21284418 发表于 2015-8-27 13:05
150×4.6mm，5μm的色谱柱，同药典方法完全一致，就是保留时间不一致，而且BP、EP、印度药典都是一样的方 ...

流速和柱温呢

hongwei2000

21284418 发表于 2015-8-27 13:13
你们做过这个产品吗，我在网上看见了哈药6厂的一个论文，也是按照BP布洛芬片（类同EP布洛芬）的方法进行 ...

保留时间变长
具有潜在的杂质没检出的风险

21284418

hongwei2000 发表于 2015-8-27 13:44
流速和柱温呢

流速、柱温按照药品要求设置，流速2mL/min，柱温不控制
你们有做过这个产品吗

hongwei2000

21284418 发表于 2015-8-27 14:15
流速、柱温按照药品要求设置，流速2mL/min，柱温不控制
你们有做过这个产品吗

没做过EP的
这个季节温度不会低的
如果压力允许
建议增大流速

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1.柱温可以提高点；
2.做梯度方法Agielnt和岛津、waters的HPLC还是有差别的
3.同一品牌的，如agilent 1260,四元泵和二元高压的保留时间也不一样。
4.A相配置的可能有问题。

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使用EP(BP)方法配制的流动相、HPLC方法、EP规定的色谱柱品牌，主峰的保留时间与药典规定的对不上。
这种情况很常见，我们每年都能碰上1-2个品种，欧盟实验室的HPLC品牌不一定都是岛津、waters、Agilent的，他们也使用一些老品牌，如ACE、gilson等。

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hongwei2000 发表于 2015-8-27 14:23
没做过EP的
这个季节温度不会低的
如果压力允许

根据USP621 的色谱条件调节的意见，如果更改了色谱柱的规格（填料粒径、长度），可以对流速进行修改
那么我现在的想法是：既然BP、EP、InP三方药典相同方法规定的RT均为20min，那么我们实验中有哪些没有注意的地方，导致RT延后至30min，
流动性配制：0.5%磷酸+340mL乙腈+600mL水，预混合后，等温度平衡至室温，再用水稀释至1000mL。
实验中，有发现水相与乙腈混溶的时候，会导致流动相温度降低，并且混合后比较不是340+600=940mL，等平衡室温后需要加入＞60mL的水才能稀释至1000mL。这样的话保留时间约30min。
如果0.5%磷酸+340mL乙腈+600mL水，预混合后，不等溶液平衡至室温，直接加入60mL水，保留时间可在约25min。
唉，过两天再试试，预混合后，不再加水稀释至1000mL，看看保留时间是多少。

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柱温、流动相配制、仪器，看来就这3个原因了

hongwei2000

21284418 发表于 2015-8-27 14:47
根据USP621 的色谱条件调节的意见，如果更改了色谱柱的规格（填料粒径、长度），可以对流速进行修改
那 ...

不同溶剂340+600一定是小于940的
由于布洛芬是酸
如果你流动相的pH偏低的话你的保留时间就会偏长
所以你可以注意一下你加入的磷酸的量是否是多了
或者加入水的量是否是少了
还有就是不知道是不是你写错了
1000ml中含有磷酸0.5ml
而不是0.5%磷酸

21284418

13655513565 发表于 2015-8-27 14:46
使用EP(BP)方法配制的流动相、HPLC方法、EP规定的色谱柱品牌，主峰的保留时间与药典规定的对不上。
这种情 ...

我查了EP、BP还有印度药典，基本上色谱方法、流动性配制一样，要求的保留时间也是一样的。
一开始也是担心过A相配制有问题，后来按照正常规定对A相配过多次，发现保留时间还是30min

流动性配制：0.5%磷酸+340mL乙腈+600mL水，预混合后，等温度平衡至室温，再用水稀释至1000mL。
实验中，有发现水相与乙腈混溶的时候，会导致流动相温度降低，并且混合后比较不是340+600=940mL，等平衡室温后需要加入＞60mL的水才能稀释至1000mL。这样的话保留时间约30min。
如果0.5%磷酸+340mL乙腈+600mL水，预混合后，不等溶液平衡至室温，直接加入60mL水，保留时间可在约25min。
唉，过两天再试试，预混合后，不再加水稀释至1000mL，看看保留时间是多少。

21284418

hongwei2000 发表于 2015-8-27 14:54
不同溶剂340+600一定是小于940的
由于布洛芬是酸
如果你流动相的pH偏低的话你的保留时间就会偏长

谢谢你的回复啊
磷酸加入量是写错了，实际操作是0.5mL，
实际操作过程中，水加多了，流动相极性增强，保留时间是延后的
我在网上看到一篇哈药6厂的布洛芬杂质的分析论文，相同方法、色谱柱（BP布洛芬片），他的保留时间也有28min，而BP规定的也是20min

klicking

21284418 发表于 2015-8-27 13:05
150×4.6mm，5μm的色谱柱，同药典方法完全一致，就是保留时间不一致，而且BP、EP、印度药典都是一样的方 ...

换个死体积小一些的仪器试试，agilent 1260和Waters e2695做下来保留时间查了约1/10，还有柱温影响很明显，我明天帮你查查我们之前做的有没有控制柱温，一般不控制柱温的情况是要保证仪器室环境温度恒定的。

21284418

klicking 发表于 2015-8-27 20:33
换个死体积小一些的仪器试试，agilent 1260和Waters e2695做下来保留时间查了约1/10，还有柱温影响很明显 ...

谢谢啊，不知道你们的色谱方法、流动相、色谱柱是怎么规定的，方便告知下吗吗
我的是1260的，Waters Empower的软件
另外，昨天试了下0.5磷酸+340乙腈+600水，温度25℃的条件，布洛芬RT为19.4min，
同时，也试了了0.5磷酸+340乙腈+600水，温度30℃的条件，布洛芬RT为18.9min，
感觉温度的影响不是很大，
今天再试试0.5磷酸+340乙腈+600水→1000mL，温度30℃的条件，看看结果怎么样

klicking

21284418 发表于 2015-8-28 09:04
谢谢啊，不知道你们的色谱方法、流动相、色谱柱是怎么规定的，方便告知下吗吗
我的是1260的，Waters Emp ...

比例是一样的，但缓冲液不一样，我们用的缓冲液是醋酸钠（0.1M），用醋酸调pH值2.5。柱温是25℃，色谱柱用的是15cm短柱。