关于体外诊断试剂中使用的胎牛血清一些的问题（再续）

唐延进

今天来分享一下胎牛血清在细胞培养过程中的一些问题，在分享之前来分享下牛血清在细胞培养中的作用：
     牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。那么这个牛血清中含有哪些成分呢？
     首先最多的是蛋白质：包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白；再次里面还含有多肽成分，它对细胞增殖、
生长有着一定作用；然后还含有激素、氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分。
     牛血清里的成分很多，但在培养基中充当着哪些角色呢？首先，提供对维持细胞指数生长的激素；再次它还可以提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力；然后在有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用；而且它还是细胞贴壁、铺展在培养基质上所需因子的重要来源；并且还具有缓冲液的作用以及提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。


    牛血清在培养基中扮演着这么多的角色，那么它在培养的过程中也会出现更多的问题，比如说：在培养过程中会出现一个个小黑点的现象，这是怎么一回事呢？
    我们一旦发现培养基中有黑点，我们先不要着急，也不要惊慌，要搞清楚这个黑点是什么？什么形成的？那么在此分享下：

首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动等。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
首先可能是细胞生长过老，破碎的细胞残骸；再有可能就是血清质量不好，反复冻融的结果；然后可能是配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；其次可能是亦有可能是配制培养基的水质、容器不合格（可应用离心、过滤的方法去除这些黑点）；最后可能是培养的原代细胞中出现小黑点（可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除）。

那么我们如何防止黑点生成呢？我认为至少要做到以下几点：

（1）尽可能地减少血清冻融次数；  
（2）培养基无需37℃水浴；
（3）培养基保持最佳PH值7.0- 7.2；  
（4）严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗；  
（5）掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

关于胎牛血清的灭活要求，胎牛血清与小牛血清有什么不同，以及牛血清的大概的制备程序等一系列问题，请继续关注...

关于体外诊断试剂中使用的胎牛血清一些的问题（续）

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