氨基酸检测 杂质与主峰分不开

zhanglianlian

最近检测一个氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH，检测方法是：流动相A，0.1%TFA+100%H2O；流动相B，0.1%TFA+100%ACN，梯度洗脱，起始比例为50:50。主峰前有一个杂质始终分不开，更换色谱柱，洗脱程序，有机溶剂（ACN换为甲醇/异丙醇），流动相PH值，没有任何效果。请各位有经验的老师指点一下吧，感谢！


附图                                             

zysx01234

你确定这是杂质吗，可能类似的邻间对同系物，对于分析同系物的方法一般是慢慢走比如降低流速、降低有机相比例，降低柱温、适当提高样品浓度等（在气相比较好实现，液相只能慢慢摸索），可能加点缓冲盐

zhanglianlian

是的，因为 Fmoc-Lys(Boc)-OH 手型异构体我们是用正相检测的，已检测数据显示这批样品中是没有手型异构体的

zhanglianlian

流速也试过，降低到0.6ml/min，分离情况没有任何变化

zysx01234

zhanglianlian 发表于 2016-9-28 16:43
是的，因为 Fmoc-Lys(Boc)-OH 手型异构体我们是用正相检测的，已检测数据显示这批样品中是没有手型异构体的

那就不要积分出来啊，全部算到主峰里面

xhw520lzz

降低比例看看

zhanglianlian

这个可以吗？因为能很明显看出是一个杂质峰

zhanglianlian

我们尝试了A:B=50:50/55：45/45：55/70：30，分离度几乎没有变化

cuntian_wang

做个dad扫描看看先

ravenhigh

你这种情况一般都不判断是杂质，就算是也可以忽略不计。以你这要求，中检所的对照品都没几个能过关的。

lindayes

换个不同的色谱柱，你现在是氨基柱吗？

zhanglianlian

cuntian_wang 发表于 2016-9-28 17:03
做个dad扫描看看先

如果DAD扫描显示峰纯度不合格，是否还是需要将杂质与主峰分离开呢?

cuntian_wang

zhanglianlian 发表于 2016-9-29 08:08
如果DAD扫描显示峰纯度不合格，是否还是需要将杂质与主峰分离开呢?

是的，有钱的话打个质谱看看到底是何方妖孽

zhanglianlian

ravenhigh 发表于 2016-9-28 19:32
你这种情况一般都不判断是杂质，就算是也可以忽略不计。以你这要求，中检所的对照品都没几个能过关的。

我们有个积分限度，0.03%，主峰前这个杂质是在积分限以上的，而且这个杂质确实影响到了主峰。我们也很纠结到底是不是需要将杂质和主峰分开，这只是个起始原料的研究，但是有审核案例：起始物料没有进行破坏性研究被审查员提出来的......

zhanglianlian

ravenhigh 发表于 2016-9-28 19:32
你这种情况一般都不判断是杂质，就算是也可以忽略不计。以你这要求，中检所的对照品都没几个能过关的。

不判断为杂质的话，应该怎样解释这个情况呢？一般什么限度范围可以忽略不计啊？想了各种方法确实分不开，并且这个氨基酸只是一个起始原料，我们也觉得没必要按照成品的要求来研究

zhanglianlian

zysx01234 发表于 2016-9-28 16:46
那就不要积分出来啊，全部算到主峰里面

不积分出来可行吗？杂质干扰到主峰，杂质本身也挺明显的，而且在积分限度以上，怎样合理解释呢？

zysx01234

zhanglianlian 发表于 2016-9-29 08:35
不判断为杂质的话，应该怎样解释这个情况呢？一般什么限度范围可以忽略不计啊？想了各种方法确实分不开， ...

是起始原料的话就交给供应商研究啊，让他们提供更详细的研究资料

zysx01234

分不开，加点三乙胺或醋酸盐